山茶‘耐冬’愈傷組織誘導與植株再生的研究.pdf

1、‘耐冬’為常綠闊葉灌木或小喬木，山茶科山茶屬植物，主要分布于青島嶗山及長門巖等島嶼，為我國山茶自然分布的最北端。‘耐冬’四季常青，花色艷麗，花型優(yōu)美，花期持久，傲雪凌霜，其種苗目前仍以傳統(tǒng)的籽播、扦插、嫁接等方式繁殖為主。但因其分布狹窄，種子和種苗來源嚴重不足，難以滿足種苗和商品苗市場的需求。
　　 本項目主要以‘耐冬’子葉作為外植體，對其愈傷組織再生植株了系統(tǒng)地研究，并獲得了優(yōu)化的‘耐冬’未成熟果消毒方式及時間、有效防止‘耐冬

2、’試驗材料（上、下胚軸，莖段及根段等）褐變的方法、‘耐冬’愈傷組織誘導的培養(yǎng)條件、‘耐冬’愈傷組織誘導、增殖以及不定芽分化的激素搭配，‘耐冬’再生植株的生根方式以及馴化、移栽方法。主要研究結果如下:
　　 (1)‘耐冬’未成熟果消毒方式及時間
　　 對較幼嫩的山茶未成熟果連同果皮消毒，而成熟的山茶果則剝?nèi)スず髮Τ墒炫哌M行消毒;500 mL的0.1％ HgCl2在配制時添加10 ml吐溫20以及2～3滴1 mol·L-1

3、的HCl溶液;使用該種升汞溶液消毒8 min，再用無菌水沖洗5～6遍，清洗完畢后將未成熟果/種子鋪在有濾紙的培養(yǎng)皿里，待吹干材料表面水分后再進行下一步實驗操作，可獲得較佳的消毒效果。
　　 (2)‘耐冬’試驗材料抗褐變的有效方法
　　 在培養(yǎng)基中添加0.2％的PVP，并將其置于弱光條件下培養(yǎng)，可以有效防止外植體的褐變情況。
　　 (3)‘耐冬’愈傷組織誘導的培養(yǎng)條件以及激素配比優(yōu)化
　　 通過DPS軟件進

4、行3因素4水平的正交試驗設計，研究蔗糖濃度、生長素與細胞分裂素配比對‘耐冬’愈傷組織的誘導率的影響，試驗結果表明:在光照條件下，優(yōu)化后的蔗糖濃度及激素配比為MS+30 g·L-1蔗糖+0.5 mg·L-12，4-D+0.5 mg·L-16-BA，其愈傷組織誘導率最高可達94.5％;在黑暗條件下，優(yōu)化后的蔗糖濃度及激素配比為MS+50 g·L-1蔗糖+1.0 mg·L-12，4-D+2.0 mg·L-16-BA，其愈傷組織誘導率最高可達9

5、8.57％。黑暗條件下培養(yǎng)誘導的愈傷組織的誘導時間較光照條件下的更短，生長量更大，且誘導率更高;但光照條件下的愈傷組織狀態(tài)更利于不定芽的分化。
　　 (4)‘耐冬’愈傷組織增殖與不定芽分化誘導激素配比的優(yōu)化
　　 優(yōu)化后的愈傷組織增殖培養(yǎng)基為MS+0.1 mg·L-1NAA+2.0 mg·L-16-BA;經(jīng)過2次轉(zhuǎn)接繼代培養(yǎng)后，將質(zhì)地密實、奶黃色或淡黃色、表面富有水潤光澤的愈傷組織轉(zhuǎn)入不定芽分化培養(yǎng)基MS+0.5 mg·