油松胚性愈傷組織誘導(dǎo)研究.pdf

1、油松（Pinus tabulaeformis Carr.）是我國北方最重要的用材和造林樹種之一。近年來，林業(yè)上主要依靠實生苗和優(yōu)樹嫁接的繁殖方法，存在繁殖系數(shù)低，周期長等缺點，遠遠不能滿足生產(chǎn)的要求。組織培養(yǎng)技術(shù)可克服傳統(tǒng)繁殖方法存在的諸多障礙，其中體細胞胚胎發(fā)生因具有繁殖系數(shù)高、結(jié)構(gòu)完整、易于保存、可制作人工種子等優(yōu)點，比器官發(fā)生具有更廣闊的應(yīng)用前景。但油松體胚誘導(dǎo)的研究在國內(nèi)外尚屬空白。本研究以油松成熟和未成熟合子胚為材料進行胚性愈

2、傷組織誘導(dǎo)，探討取材時期和植物生長調(diào)節(jié)劑配比對油松胚性愈傷組織誘導(dǎo)的影響，為建立該樹種體細胞胚胎發(fā)生技術(shù)提供實驗資料和技術(shù)支持，為油松離體快速繁殖及遺傳轉(zhuǎn)化研究奠定基礎(chǔ)。研究結(jié)果如下:
　　(1)合子胚的發(fā)育階段對油松愈傷組織及胚性愈傷組織的誘導(dǎo)具有明顯影響。本研究發(fā)現(xiàn)7月初到8月中旬處于胚胎選擇時期的合子胚能誘導(dǎo)愈傷組織發(fā)生。在7月底采集的外植體上獲得最高的愈傷組織誘導(dǎo)率60％，但幾乎均為非胚性愈傷組織。8月1日采集的外植體胚性

3、愈傷組織的誘導(dǎo)率最高，達4.5％，但在之后的發(fā)育中逐漸死亡。而7月初取材的外植體誘導(dǎo)生成的胚性愈傷組織后期分化潛能高，增殖能力最強，但誘導(dǎo)率低僅有1.7％。
　　(2)植物生長調(diào)節(jié)劑配比對油松愈傷組織及胚性愈傷組織的誘導(dǎo)有影響，且不同發(fā)育時期的合子胚受激素的影響不同。本研究在DCR培養(yǎng)基+5.0mg/L2，4-D+1.0mg/L BA時，獲得愈傷組織的最高誘導(dǎo)率，達60％。由于獲得的胚性愈傷組織極少，未能找出植物生長調(diào)節(jié)劑對愈傷組

4、織誘導(dǎo)影響的規(guī)律性。但直觀分析認為，DCR'培養(yǎng)基+1.0mg/L2，4-D的培養(yǎng)條件較適宜于油松胚性愈傷組織的誘導(dǎo)。
　　(3)不含植物生長調(diào)節(jié)劑的DCR培養(yǎng)基適合油松胚性愈傷組織的增殖，且用于增殖的愈傷組織以5×5mm2為佳。
　　(4)胚性愈傷組織的分化和后期發(fā)育中，ABA的作用明顯大于NAA和IBA;肌醇的存在有利于胚性愈傷組織胚性的保持。
　　(5)在DCR、SH、LOB、B5和MSG等5種培養(yǎng)基中，DCR培