
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文檔簡介
1、棗樹(Ziziphus jujuba Mill.)已經(jīng)發(fā)展成為我國第一大干果樹種,快速發(fā)展的棗產(chǎn)業(yè),迫切需要換代型品種。但棗樹雜交育種難度大,芽變選種費時費力,因此人們開始嘗試其它的育種方法,如多倍體育種等。本課題組前期在田間愈傷組織誘導(dǎo)及芽再生技術(shù)體系基礎(chǔ)上,建立了免嵌合體純化的多倍體誘導(dǎo)技術(shù)并創(chuàng)制了20余個棗品種和酸棗類型的純合多倍體種質(zhì)。本研究擬開展田間愈傷組織誘導(dǎo)和芽再生技術(shù)體系在原位遺傳轉(zhuǎn)化、EMS誘變等中的應(yīng)用研究,以期為免
2、嵌合體純化的轉(zhuǎn)基因育種、誘變育種等奠定基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:
1.枝條粗度對芽再生有一定的影響。分別對粗度1.0-2.5cm的枝條進行了愈傷組織誘導(dǎo)和芽再生研究,隨著枝條的增粗,出芽數(shù)隨之增多,2.0-2.5cm的枝條出芽數(shù)顯著增高,但考慮到較粗枝條的數(shù)量較少且對樹體傷害較大,因此認為適宜的枝條粗度為1.5-2.0cm,對樹體傷害小,芽再生能力強。
2.發(fā)根農(nóng)桿菌的侵染時期影響‘大荔龍棗’枝條截面愈傷組織誘導(dǎo)和芽再
3、生能力。分別在截枝后的第1d、4d、7d、10d進行侵染,侵染后,愈傷組織的生長短暫受抑,第20d后各處理間的愈傷組織生長量差異不大;在截枝后7d之內(nèi)進行侵染,芽再生能力強,但沒有獲得轉(zhuǎn)化芽。
3.根癌農(nóng)桿菌菌液濃度影響‘月光棗’枝條截面愈傷組織誘導(dǎo)、芽再生能力及轉(zhuǎn)化效率。菌液濃度(OD600)在0.4-1.2范圍內(nèi)對枝條截面愈傷組織量沒有顯著影響;截枝后20d,菌液濃度為0.8的處理出芽數(shù)最多,但30d時各處理出芽數(shù)與對照之
4、間均無顯著差異,說明菌液可在前期影響愈傷組織出芽,但并不會影響最終的出芽數(shù)。本研究在菌液濃度為0.4時獲得了2個轉(zhuǎn)化芽,觀察發(fā)現(xiàn),轉(zhuǎn)化芽生長矮小,長勢較弱,這可能是由于農(nóng)桿菌的侵染影響了枝條的生長發(fā)育。
4.根癌農(nóng)桿菌侵染時間對‘月光棗’枝條截面愈傷組織誘導(dǎo)、芽再生能力的影響不顯著。侵染時間分別為12h、24h、36h和48h時,愈傷等級及出芽數(shù)均無顯著差異。
5.根癌農(nóng)桿菌的侵染次數(shù)影響‘月光棗’枝條截面愈傷組織誘
5、導(dǎo)、芽再生能力及轉(zhuǎn)化效率。愈傷組織誘導(dǎo)后第10d,侵染3次較侵染2次或1次的愈傷組織等級低,并且也低于對照;愈傷組織誘導(dǎo)后第20d,不同侵染次數(shù)愈傷組織等級差異不明顯,但有隨著侵染次數(shù)的增多而降低的趨勢。愈傷組織誘導(dǎo)后第20d,出芽數(shù)隨著侵染次數(shù)的增多而降低,侵染1次的出芽數(shù)與對照差異不顯著,但卻顯著高于侵染2次或3次的出芽數(shù)。愈傷組織誘導(dǎo)后第30d,不同侵染次數(shù)的出芽數(shù)差異均不顯著。本試驗也未獲得轉(zhuǎn)化芽,因此從利于出芽及省時方面考慮,
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