擬南芥原生質(zhì)體誘導愈傷組織的研究.pdf

1、隨著農(nóng)業(yè)生物技術(shù)的發(fā)展，植物原生質(zhì)體培養(yǎng)技術(shù)愈來愈受到重視，它為細胞工程和基因工程開辟了廣闊的前景。植物原生質(zhì)體是除去細胞壁外，僅為原生質(zhì)膜所包裹的裸露細胞。由于失去了細胞壁的保護，所以原生質(zhì)體十分脆弱，因此擬南芥原生質(zhì)體誘導產(chǎn)生愈傷組織受到多種因素的影響，但是目前的工作缺乏系統(tǒng)而準確的研究。本文使用擬南芥葉片原生質(zhì)體為材料，進行了原生質(zhì)體誘導愈傷組織的研究，在不斷地重復實驗中，將擬南芥原生質(zhì)體誘導愈傷組織的體系不斷優(yōu)化，并最終確定原生

2、質(zhì)體誘導愈傷組織培養(yǎng)過程中的各種實驗條件。結(jié)果如下：
　　 1.酶解對原生質(zhì)體的影響
　　 酶解液的濃度和酶解時間對原生質(zhì)體的數(shù)量、活力和完整性有很大的影響。我們設計了酶液的9種組合，在相同的酶解時間里，對擬南芥葉片原生質(zhì)體的提取情況進行了分析。此后，我們確定了酶液的濃度后，在相同酶液濃度下不同酶解時間的擬南芥葉片原生質(zhì)體提取情況進行了分析。通過在熒光顯微鏡下的觀察，以及FDA染色分析得出結(jié)論：在纖維素酶濃度為1.5％，

3、果膠酶濃度為1.0％，酶解時間為12h時能得到數(shù)量多而且活力旺盛的原生質(zhì)體。
　　 2.影響原生質(zhì)體提取的因素
　　 提取原生質(zhì)體的過程中，擬南芥原生質(zhì)體的質(zhì)量受擬南芥取材時期、取材部位、離心等的影響。我們將擬南芥的葉片分為已經(jīng)抽薹的擬南芥的葉片和未抽薹的擬南芥葉片，已經(jīng)抽薹的擬南芥葉片又分為蓮座葉和莖生葉。已經(jīng)抽薹的擬南芥的葉片提取的原生質(zhì)體數(shù)量少，活性低，容易破裂，而未抽薹的擬南芥葉片原生質(zhì)體提取的原生質(zhì)體數(shù)量多，活

4、性高，有一定的韌性，不易破裂。已經(jīng)抽薹的擬南芥的蓮座葉和莖生葉的原生質(zhì)體提取后在數(shù)量和活性上無太大區(qū)別。離心轉(zhuǎn)速采用50g，離心方法用梯度離心的效果最好。
　　 3.影響原生質(zhì)體培養(yǎng)的因素
　　 提取原生質(zhì)體的不同生態(tài)型、包埋原生質(zhì)體以及培養(yǎng)原生質(zhì)體的方法對擬南芥原生質(zhì)體誘導愈傷組織有很大的影響。Ws生態(tài)型較Col生態(tài)型的原生質(zhì)體更容易誘導產(chǎn)生愈傷組織，同時我們使用了以根為外植體誘導產(chǎn)生的愈傷組織的原生質(zhì)體，誘導產(chǎn)生愈傷