潰瘍性結(jié)腸炎虛實證候分型與腸道菌群結(jié)構(gòu)的差異性研究.pdf

1、目的：
　　通過對潰瘍性結(jié)腸炎(UC)患者和健康人腸道菌群的多樣性、相似性以及種屬構(gòu)成等研究，闡明UC不同虛實證候間腸道菌群結(jié)構(gòu)的差異性，進一步通過虛實證候與腸道菌群結(jié)構(gòu)差異的差異性分析，為闡明UC虛實證候的物質(zhì)基礎(chǔ)和病理機制以及UC不同虛實證候患者之間腸道菌群結(jié)構(gòu)的差異性提供理論基礎(chǔ)和實驗依據(jù)。
　　方法：
　　以UC患者與健康志愿者為研究對象，建立中醫(yī)證候診斷、納入和排除標準，分為濕熱內(nèi)蘊證組、脾胃氣虛證組、脾虛濕

2、熱證組和健康對照組，采集糞便標本并提取糞便菌群總DNA;經(jīng)16SrDNA V3區(qū)PCR擴增后，采用變性梯度凝膠電泳(DGGE)進行腸道菌群DNA指紋圖譜分析;MiSeq測序技術(shù)開展腸道菌群16SV3+V4區(qū)高通量測序及生物信息學分析;基于16 SrDNA指紋圖譜和16SV3+V4區(qū)生物信息學數(shù)據(jù)，研究分析UC不同虛實證候組患者與健康人群腸道菌群結(jié)構(gòu)的差異性。
　　結(jié)果：
　　腸道菌群DNA指紋圖譜分析結(jié)果表明:圖譜中三種證型

3、所呈現(xiàn)的條帶數(shù)沒有明顯差異。三種UC證型患者腸道菌群多樣性、相似性有差異，并且三種UC證型的患者腸道菌群的組內(nèi)相似性系數(shù)高于組間相似性系數(shù)。脾胃氣虛證組UC患者組內(nèi)相似性系數(shù)最高，脾虛濕熱證組UC患者組內(nèi)相似性系數(shù)最低。三種證型中，濕熱內(nèi)蘊證組UC患者的多樣性指數(shù)最低，脾胃氣虛證組UC患者的多樣性指數(shù)最高。
　　16SV3+V4區(qū)測序及生物信息學分析結(jié)果表明:UC患者擬桿菌和厚壁菌門所占比例相對其他組較大且數(shù)量基本恒定，但它們在不

4、同虛實證候組內(nèi)中所占的比例有顯著差異。厚壁菌門在濕熱內(nèi)蘊組及脾虛濕熱組中所占比例低于健康人組(P＜0.05)，其中韋榮球菌在厚壁菌門中較為突出，在濕熱內(nèi)蘊組及脾虛濕熱組中所占比例低于健康人組(P＜0.05)，其在脾胃氣虛組中所含比例高于濕熱內(nèi)蘊組(P＜0.05)。變形桿菌門在脾虛濕熱組中所占比例高于脾胃氣虛組(P＜0.05)。變形桿菌門中嗜血桿菌在濕熱內(nèi)蘊組中所占比例高于脾胃氣虛組和脾虛濕熱組(P＜0.05)。擬桿菌門中擬桿菌和普氏菌在

5、四組中所占比例也有所不同。擬桿菌在濕熱內(nèi)蘊組中所占比例高于健康人組(P＜0.05)。普氏菌在三組虛實證型的潰瘍性結(jié)腸炎受試者腸道菌群中所占比例均低于健康人組(P＜0.05)。放線菌門中棒狀桿菌在濕熱內(nèi)蘊組中所占比例高于脾胃氣虛組(P＜0.05)。真桿菌屬在脾胃氣虛組和脾虛濕熱組中所占比例均小于健康人組(P＜0.05)。
　　DGGE法和測序結(jié)果反映出的UC患者不同虛實證候組及健康人組的腸道菌群結(jié)構(gòu)差異性和相似性結(jié)果基本一致。