腸道菌群與潰瘍性結(jié)腸炎關(guān)系的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:通過對潰瘍性結(jié)腸炎患者與正常對照者之間糞便菌群種類及特異菌群的定性、定量研究,了解潰瘍性結(jié)腸炎患者腸道菌群結(jié)構(gòu)差異及數(shù)量的變化,探索腸道菌群與潰瘍性結(jié)腸炎的關(guān)系。
  方法:收集潰瘍性結(jié)腸炎患者及正常對照者(各35例)新鮮糞便作為研究標(biāo)本,對照組在性別、年齡、族別方面與潰瘍性結(jié)腸炎組按1:1方式進(jìn)行匹配,用試劑盒提取糞便細(xì)菌基因組 DNA。根據(jù)細(xì)菌的16SrDNA基因序列設(shè)計 V3區(qū)通用引物,用變性梯度凝膠電泳-聚合酶鏈反應(yīng)

2、法(DGGE-PCR)篩選出兩組腸道菌群的差異結(jié)構(gòu),將差異條帶切膠回收、純化、克隆后進(jìn)行基因測序,測序結(jié)果經(jīng)GenBank比對后確定菌群種類。再根據(jù)細(xì)菌的16SrDNA基因序列設(shè)計大腸埃希菌、乳酸桿菌屬、雙歧桿菌屬的種屬特異性引物,運用實時熒光定量-聚合酶鏈反應(yīng)法(RT-PCR),定量檢測出兩組中這三種細(xì)菌的數(shù)量變化。
  結(jié)果:DGGE-PCR后,潰瘍性結(jié)腸炎患者與正常對照組之間有多條不同的條帶,其中一條帶在兩組中出現(xiàn)的頻率經(jīng)統(tǒng)

3、計學(xué)分析后有差異(P﹤0.05)。在GenBank比對后,確定此菌為不能培養(yǎng)且無具體歸屬的細(xì)菌;經(jīng) RT-PCR對大腸埃希菌、乳酸桿菌屬、雙歧桿菌屬定量檢測后,正常對照組與病例組每克糞便中細(xì)菌的拷貝數(shù)分別為大腸埃希菌(4.62±1.10;5.27±1.02)、乳酸桿菌屬(4.99±0.75;4.65±0.95),雙歧桿菌屬(5.07±0.95;4.93±0.99),病例組大腸桿菌數(shù)量明顯增多(t=2.540, P=0.013),而乳酸及

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