百合地黃湯干預(yù)陰虛型心理亞健康臨床代謝組學(xué)研究.pdf

1、心理亞健康是一種介于心理健康與精神疾病的中間狀態(tài)，其發(fā)生率高且逐年增加，如長(zhǎng)期得不到及時(shí)合理的干預(yù)，極易自發(fā)地轉(zhuǎn)變?yōu)橐钟?、焦慮、睡眠障礙等神經(jīng)精神系統(tǒng)疾病，嚴(yán)重危害人類(lèi)健康。因此，早期預(yù)防其發(fā)展成為各種心理疾病具有重要的臨床意義。心理亞健康存在不同的證候體質(zhì)分型，臨床上常根據(jù)不同的分型制定心理亞健康的診斷標(biāo)準(zhǔn)并進(jìn)行藥物干預(yù)研究。陰虛型心理亞健康是心理亞健康的一種常見(jiàn)體質(zhì)分型，其郁郁寡歡、心神不寧、食欲異常的臨床癥狀與陰虛內(nèi)熱的病機(jī)與百合

2、病較為相似。百合地黃湯包含生地黃、百合兩味藥材，是治療百合病的經(jīng)典古方。因此，課題組前期采用百合地黃湯對(duì)自制量表篩選出的陰虛型心理亞健康受試者進(jìn)行干預(yù)，臨床效果顯著，并采用NMR代謝組學(xué)技術(shù)發(fā)現(xiàn)了與療效相關(guān)的差異代謝物。但上述研究并未對(duì)百合地黃湯的干預(yù)機(jī)制進(jìn)行探討。代謝組學(xué)作為系統(tǒng)生物學(xué)的分支，從代謝產(chǎn)物的層面上反應(yīng)體內(nèi)的代謝變化，網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)融合多系統(tǒng)生物學(xué)、多向藥理學(xué)等多種學(xué)科，對(duì)于中藥多成分-多靶點(diǎn)-多途徑的干預(yù)機(jī)制研究有較強(qiáng)的優(yōu)勢(shì)

3、。因此以?xún)煞N手段為結(jié)合對(duì)于研究百合地黃湯發(fā)揮干預(yù)作用的活性成分、發(fā)現(xiàn)與百合地黃湯干預(yù)效果相關(guān)的差異代謝物及其通路，進(jìn)而探討其可能的作用機(jī)制提供了技術(shù)支持。
　　目的：預(yù)測(cè)百合地黃湯發(fā)揮干預(yù)作用的活性成分及其靶點(diǎn)，尋找并篩選臨床血漿樣本中與百合地黃湯干預(yù)陰虛型心理亞健康療效相關(guān)的差異代謝物及其通路，構(gòu)建“代謝物—代謝通路—通路靶點(diǎn)—作用靶點(diǎn)—活性成分”網(wǎng)絡(luò)，將藥物活性成分、靶點(diǎn)預(yù)測(cè)與代謝組學(xué)結(jié)果進(jìn)行關(guān)聯(lián)，探討百合地黃湯干預(yù)陰虛型心理

4、亞健康的可能的作用機(jī)制。
　　方法：本研究首先采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法對(duì)百合地黃湯活性成分作用靶點(diǎn)進(jìn)行預(yù)測(cè)，篩選出與陰虛型心理亞健康臨床癥狀相關(guān)的作用靶點(diǎn)。然后對(duì)陰虛型心理亞健康受試者干預(yù)前后的血漿樣本以及健康志愿者的血漿樣本進(jìn)行 GC-MS和 LC-MS代謝組學(xué)分析。通過(guò)XCMS軟件包和Compound Discoverer2.0軟件分別對(duì)GC-MS、LC-MS圖譜信息進(jìn)行濾噪、峰對(duì)齊、提取等前處理，最終以保留時(shí)間、峰面積、質(zhì)核比（

5、m/z）的數(shù)據(jù)矩陣導(dǎo)入到SIMCA-P14.0進(jìn)行多元統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)合VIP值和SPSS軟件t檢驗(yàn)結(jié)果，尋找與百合地黃湯干預(yù)效果相關(guān)的差異代謝物及代謝通路，并對(duì)其生物意義進(jìn)行闡述。最后NMR、GC-MS、LC-MS代謝組學(xué)結(jié)果進(jìn)行整合，篩選出與百合地黃湯干預(yù)效果相關(guān)性大的代謝通路，結(jié)合網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法，將通路的關(guān)鍵基因與百合地黃湯活性成分作用靶點(diǎn)進(jìn)行整合，將代謝物、代謝通路、作用靶點(diǎn)以及活性成分相結(jié)合來(lái)探討百合地黃湯干預(yù)陰虛型心理亞健康的

6、可能的作用機(jī)制。
　　結(jié)果：1.篩選出11個(gè)百合地黃湯活性成分并預(yù)測(cè)出21個(gè)潛在作用靶點(diǎn)，預(yù)測(cè)的靶點(diǎn)主要參與了GABA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，cAMP信號(hào)通路以及單胺轉(zhuǎn)運(yùn)等相關(guān)生物過(guò)程。表明百合地黃湯對(duì)陰虛型心理亞健康的干預(yù)作用可能與G-蛋白偶聯(lián)受體活性和單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)的表達(dá)有關(guān)。
　　2.采用 GC-MS代謝組學(xué)分析方法對(duì)百合地黃湯干預(yù)前后的陰虛型心理亞健康人群以及健康人群血漿樣本進(jìn)行分析，共指認(rèn)出氨基酸、有機(jī)酸等44中內(nèi)源性代謝產(chǎn)物，

7、并篩選出8個(gè)療效相關(guān)的差異代謝物，主要涉及脂質(zhì)代謝、能量代謝以及氨基酸代謝。
　　3.在前期工作的基礎(chǔ)上，對(duì)人體血漿LC-MS代謝組學(xué)方法進(jìn)行優(yōu)化，并對(duì)健康對(duì)照組和百合地黃湯干預(yù)前后的陰虛型心理亞健康人群的血漿樣本進(jìn)行分析。找到了與百合地黃湯干預(yù)效果相關(guān)的14個(gè)差異代謝物，通過(guò)對(duì)差異代謝物的相關(guān)代謝通路分析發(fā)現(xiàn)百合地黃湯可能通過(guò)對(duì)氨基酸代謝（Amino acid metabolism）和脂肪酸代謝（Fatty acid metab

8、olism）這兩大類(lèi)代謝的調(diào)節(jié)發(fā)揮干預(yù)作用。
　　4.對(duì)三組代謝組學(xué)手段尋找到的27個(gè)差異代謝物進(jìn)行分析，篩選出9條重要性大的代謝通路，對(duì)代謝通路中的關(guān)鍵基因以及百合地黃湯活性成分作用靶點(diǎn)的相互作用關(guān)系進(jìn)行分析，最終篩選出有直接互作關(guān)系的三條通路，梓醇、地黃苷A的作用靶點(diǎn) GLO1(乙二醛酶 I，glyoxalase I)即為乳酸參與的丙酮酸鹽代謝通路中的關(guān)鍵基因，甾體皂苷Compound10，豆甾醇，β-谷甾醇的作用靶點(diǎn)MAOA

9、(單胺氧化酶A， monoamine oxidase A)、MAOB（單胺氧化酶B，monoamine oxidase B）均為代謝通路谷氨酸代謝和酪氨酸代謝的關(guān)鍵基因，其中酪氨酸在兩條通路中均有涉及，苯丙氨酸參與苯丙氨酸代謝通路，3-(3,4-二羥基苯基)乳酸則參與了酪氨酸代謝通路。
　　結(jié)論：百合地黃湯主要參與氨基酸代謝、能量代謝、脂肪酸代謝以及神經(jīng)遞質(zhì)合成等代謝通路。百合地黃湯干預(yù)陰虛型心理亞健康的的主要藥理活性成分為梓醇、