DHA抗缺氧性肺動(dòng)脈高壓的離子機(jī)制.pdf

1、目的:
　　 ω-3類(lèi)脂肪酸可通過(guò)抗炎、抗血小板聚集、抗血栓形成、調(diào)節(jié)脂肪代謝、改善內(nèi)皮細(xì)胞功能等發(fā)揮其防治心血管疾病的功效。作為其主要成分之一的二十二碳六烯酸(DHA)能通過(guò)調(diào)節(jié)心肌細(xì)胞及冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞上的多種離子通道而起抗心律失常及擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈等作用。本研究擬采用血管功能試驗(yàn)及膜片鉗技術(shù)探討DHA對(duì)低氧誘導(dǎo)的肺血管收縮的影響及電生理機(jī)制。
　　 方法:
　　 (1)將大鼠三級(jí)肺動(dòng)脈制備成去除內(nèi)皮的血管環(huán)，

2、急性缺氧溶液誘導(dǎo)血管環(huán)收縮后，用DHA處理血管環(huán)，測(cè)定其對(duì)血管張力的作用。(2)急性酶解法分離出單個(gè)活性良好的肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(PASMC)，免疫熒光鑒定細(xì)胞類(lèi)型。(3)建立大鼠PASMCs全細(xì)胞膜片鉗的方法并觀察DHA對(duì)PASMCs細(xì)胞膜上鉀離子通道的作用。
　　 結(jié)果:
　　 (1)急性酶解法獲得單個(gè)PASMC，呈梭形，香蕉狀，表面光滑，邊界清楚。α—actin免疫熒光鑒定分離所得的細(xì)胞為平滑肌細(xì)胞。
　　

3、(2)全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄電壓門(mén)控性鉀離子通道(KV)和鈣離子激活性鉀通道(KCa)電流。5mmol/L的KV通道特異性抑制劑4-氨基吡啶（4-AP）可明顯抑制所記錄電流，使電流-電壓曲線向右下移，引起大鼠PASMCs去極化;+60mV時(shí)電流密度從（134.69±4.73pA/pF）減少到（35.02±5.64pA/pF,p＜0.05）。1mmol/L的KCa通道特異性抑制劑四乙胺(TEA)可明顯抑制所記錄電流，使電流電壓-曲線向右下移

4、;在+60mV時(shí)，KCa電流密度從（15.10±1.62pA/pF）減少到(3.82±0.72pA/pF,p＜0.05)。
　　 (3)DHA(1μmol/L，10μmol/L)可顯著舒張急性缺氧誘發(fā)的血管收縮(p＜0.05，n=6)，最大舒張率為(48.63±9.16)％。
　　 (4)DHA可顯著激活總鉀離子電流(p＜0.01）。在指令電位+60mV時(shí)，細(xì)胞外給予DHA（10μmol/L）后，該電流由（121.52±

5、17.43pA/pF）增加至(209.81±12.57pA/pF)。該鉀電流為混合電流，能被蝎毒素(IBTX)和4-AP部分阻斷。DHA對(duì)KV通道可產(chǎn)生顯著抑制作用(p＜0.05，n=6），指令電壓+60mV時(shí)的抑制率是(63.21±7.32)％。當(dāng)DHA濃度為0.01μmol/L時(shí)，大電導(dǎo)鈣激活的鉀離子電流(IBKCa)無(wú)顯著激活作用;當(dāng)濃度為0.1，1，10μmol/L時(shí)，可顯著激活I(lǐng)BKCa。不同濃度DHA(0，0.1，1，10)

6、μmol/L在指令電壓+60mV時(shí)，IBKCa電流密度分別為(30.5±6.5,59.4±5.8,87.2±4.3,117.3±7.1)pA/pF(p＜0.01,n=5)。
　　 (5)急性缺氧，指令電壓為+60mV時(shí)，IBKCa電流密度從(32.7±8.5)pA/pF降低至（11.9±5.8）pA/pF(p＜0.01，n=5）。DHA(10μmol/L)能明顯逆轉(zhuǎn)急性缺氧對(duì)IBKCa的抑制作用(p＜0.01，n=5)。