林麝（Moschus berezovskii）細胞遺傳學及分子標記微衛(wèi)星的研究.pdf

1、麝是我國極其重要的資源動物。由于野外亂捕濫獵和棲息地的不斷破壞，我國麝類數(shù)量急劇減少、現(xiàn)存麝類已面臨瀕危。本研究對林麝的核型、染色體G-帶帶型、林麝微衛(wèi)星DNA的分離和多態(tài)性進行了研究，并對野生和圈養(yǎng)林麝群體的遺傳多樣性進行了分析?！　”狙芯恳粤主晖庵苎馨图毎麨閷嶒灢牧?，首先建立了適合林麝淋巴細胞增殖的培養(yǎng)體系，即在RPMI1640綜合培養(yǎng)基中加入等量的植物血球凝集素PHA和伴刀豆球蛋白ConA，38℃培養(yǎng)。利用此法培養(yǎng)的細胞用于制

2、備染色體，確定林麝核型是2N=58，且全都是端著絲粒染色體。本研究還首次應用染色體G-帶技術，對林麝染色體的G-帶帶型進行了研究。結(jié)果表明，林麝核型中，最長的一條染色體是X染色體，最短的是Y染色體?！　∮捎谖⑿l(wèi)星標記方法的可靠性和特異性，本研究首先構(gòu)建了3個林麝基因組微衛(wèi)星富集文庫，即(AC)n文庫、(AAG)n文庫和(GATA)n文庫，每個文庫含有上萬個轉(zhuǎn)化子?！　±梅蛛x到的林麝微衛(wèi)星DNA對其多態(tài)性及在圈養(yǎng)林麝中的應用進行了研

3、究。首先用蛋白酶K、酚/氯仿提取林麝毛囊DNA，每個毛囊提取的DNA約為4～9ng，可用于限制酶切、基因和微衛(wèi)星座位的擴增。然后對分離得到的林麝微衛(wèi)星座位進行進一步的篩選和PCR反應條件優(yōu)化，最后對米亞羅野生林麝和都江堰金鳳山及馬爾康圈養(yǎng)林麝的遺傳多樣性進行了研究。微衛(wèi)星多態(tài)性研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，從林麝中分離到8個穩(wěn)定的、具有高度多態(tài)性的微衛(wèi)星分子標記。研究結(jié)果對林麝保護措施的制定提供了最直接的理論依據(jù)，因此在本文中還提出了保護好圈養(yǎng)林麝種群