林麝（Moschus berezovskii）細(xì)胞遺傳學(xué)及分子標(biāo)記微衛(wèi)星的研究.pdf

1、麝是我國(guó)極其重要的資源動(dòng)物。由于野外亂捕濫獵和棲息地的不斷破壞，我國(guó)麝類數(shù)量急劇減少、現(xiàn)存麝類已面臨瀕危。本研究對(duì)林麝的核型、染色體G-帶帶型、林麝微衛(wèi)星DNA的分離和多態(tài)性進(jìn)行了研究，并對(duì)野生和圈養(yǎng)林麝群體的遺傳多樣性進(jìn)行了分析。　　本研究以林麝外周血淋巴細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)材料，首先建立了適合林麝淋巴細(xì)胞增殖的培養(yǎng)體系，即在RPMI1640綜合培養(yǎng)基中加入等量的植物血球凝集素PHA和伴刀豆球蛋白ConA，38℃培養(yǎng)。利用此法培養(yǎng)的細(xì)胞用于制

2、備染色體，確定林麝核型是2N=58，且全都是端著絲粒染色體。本研究還首次應(yīng)用染色體G-帶技術(shù)，對(duì)林麝染色體的G-帶帶型進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，林麝核型中，最長(zhǎng)的一條染色體是X染色體，最短的是Y染色體。　　由于微衛(wèi)星標(biāo)記方法的可靠性和特異性，本研究首先構(gòu)建了3個(gè)林麝基因組微衛(wèi)星富集文庫，即(AC)n文庫、(AAG)n文庫和(GATA)n文庫，每個(gè)文庫含有上萬個(gè)轉(zhuǎn)化子?！　±梅蛛x到的林麝微衛(wèi)星DNA對(duì)其多態(tài)性及在圈養(yǎng)林麝中的應(yīng)用進(jìn)行了研

3、究。首先用蛋白酶K、酚/氯仿提取林麝毛囊DNA，每個(gè)毛囊提取的DNA約為4～9ng，可用于限制酶切、基因和微衛(wèi)星座位的擴(kuò)增。然后對(duì)分離得到的林麝微衛(wèi)星座位進(jìn)行進(jìn)一步的篩選和PCR反應(yīng)條件優(yōu)化，最后對(duì)米亞羅野生林麝和都江堰金鳳山及馬爾康圈養(yǎng)林麝的遺傳多樣性進(jìn)行了研究。微衛(wèi)星多態(tài)性研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，從林麝中分離到8個(gè)穩(wěn)定的、具有高度多態(tài)性的微衛(wèi)星分子標(biāo)記。研究結(jié)果對(duì)林麝保護(hù)措施的制定提供了最直接的理論依據(jù)，因此在本文中還提出了保護(hù)好圈養(yǎng)林麝種群