海帶微衛(wèi)星標記的開發(fā)及遺傳多樣性研究.pdf

1、海帶是全球重要的經(jīng)濟海藻,也是人工栽培歷史最長和產(chǎn)量最高的海藻,我國的海帶栽培面積及栽培總產(chǎn)量均居世界首位。海帶在食品、醫(yī)藥、化工等領域都有很廣泛的應用,提取的褐藻膠、甘露糖、碘等工業(yè)原料具有較高的經(jīng)濟價值。經(jīng)過幾十年的發(fā)展,海帶在人工育種、育苗及栽培方面取得了顯著成效,但是有關海帶的分子遺傳學研究、經(jīng)濟性狀遺傳等應用基礎研究還是比較薄弱。因此,積極開展海帶的分子遺傳學研究將對海帶種質保存、新品種培育、親緣關系鑒定、遺傳圖譜構建等方面奠

2、定堅實基礎。
　　 微衛(wèi)星標記作為一種較理想的DAN分子標記技術,已越來越多的用于動植物遺傳學研究中,但是在海帶中的研究進展較為緩慢,現(xiàn)公布的可直接用于海帶遺傳性狀研究的微衛(wèi)星標記數(shù)量僅60對,已不能滿足當前海帶分子遺傳研究的需要,所以開發(fā)一批具有高多態(tài)性和高通用性的海帶微衛(wèi)星引物勢在必行。本研究首次采用海帶微衛(wèi)星DNA富集文庫大規(guī)模測序工作,測序2853個克隆并獲得1092條有效序列,其中593條序列中含有微衛(wèi)星位點。其中完美

3、型標記351個,占59％；非完美型標記49個,占8％；混合型標記193個,占33％。在所有微衛(wèi)星位點中,二堿基重復類型最多占74.74％,其中CA、GA重復最普遍。三堿基、四堿基、五堿基和六堿基重復類型分別占11.04％、6.27％、4.59％和3.36％。使用Primer Premier5.0軟件對微衛(wèi)星序列進行引物設計,最后設計得到266對微衛(wèi)星引物可用于海帶分子遺傳學研究。
　　 篩選出23對具有多態(tài)性的SSR引物對7個不

4、同物種共13個海帶配子體克隆進行遺傳多樣性分析,23對SSR引物共擴增出69個等位基因,平均每個微衛(wèi)星位點有3.0個等位基因。13份海帶配子體克隆材料的遺傳相似性系數(shù)介于0.4653～0.9901之間,用UPGMA法進行聚類分析結果顯示,7個不同物種可分為兩大類,一類全部來源日本,包括利尻海帶、真海帶、狹葉海帶和皺海帶四種海帶；另一類全部來源德國,包括極北海帶、掌狀海帶和糖海帶三種海帶。發(fā)現(xiàn)引物SSR055可在海帶屬配子體克隆種質鑒定及

5、雜交子代親緣關系分析中具有一定的價值。
　　 篩選出102對SSR引物對海帶五個栽培種群(三海、福建南方種、榮福、愛倫灣、生產(chǎn)種)進行遺傳多樣性分析,共擴增出185個等位位點,平均每個引物擴增出的等位基因數(shù)為1.81個。5個栽培群體中檢測到的有效等位基因數(shù)(Ne)為1.3237～1.4282,Nei's基因多樣性指數(shù)(H)為0.1946～0.2529,香農(nóng)指數(shù)(I)為0.2912～0.3792,多態(tài)性位點比率為54.59％～72