PA-MSHA預(yù)處理對膿毒癥-嚴重膿毒癥大鼠腸道損傷的預(yù)防作用研究.pdf

1、目的:
　　本課題通過腹腔內(nèi)注射混合活菌株建立膿毒癥、嚴重膿毒癥大鼠模型，研究銅綠假單胞菌菌毛甘露糖敏感血凝素（PA-MSHA）預(yù)處理對膿毒癥及嚴重膿毒癥大鼠腸組織和腹腔灌洗液細胞因子（IL-1、IL-6、TNF-α、IL-10）的影響；對腸道ICAM-1、VCAM-1表達的影響；對外周血中性粒細胞表面TLR4表達的影響；對外周血中性粒細胞體外趨化的影響。旨在探討PA-MSHA對膿毒癥/嚴重膿毒癥大鼠腸道損傷的可能預(yù)防機制。

2、>　　方法:
　?。?）選取健康清潔SPF級雄性SD大鼠40只（230±10g），將大鼠隨機分為5組：空白組、膿毒癥組、PA-膿毒癥組、嚴重膿毒癥組、PA-嚴重膿毒癥組。
　　（2）預(yù)給藥：連續(xù)給藥7天，空白組、膿毒癥組、嚴重膿毒癥組分別給予0.9％氯化鈉注射液（0.3ml/只/天背部皮下注射）；PA-膿毒癥組、PA-嚴重膿毒癥組分別給予（PA-MSHA0.3ml/只/天背部皮下注射）。
　?。?）第8天造模，空白組取

3、3ml0.9%氯化鈉注射液經(jīng)大鼠右下腹腹腔注射；膿毒癥組、PA-膿毒癥組取1.6ml/kg糞便懸液（根據(jù)Gonnert FA人糞便懸液腹腔注射法改良預(yù)先制備好），0.9%氯化鈉注射液稀釋至3 mL，經(jīng)大鼠右下腹腹腔注射；嚴重膿毒癥組、PA-嚴重膿毒癥組取4ml/kg糞便懸液，0.9%氯化鈉注射液稀釋至3mL，經(jīng)大鼠右下腹腹腔注射。
　?。?）模型建立成功后，用3%戊巴比妥鈉注射液麻醉大鼠，監(jiān)測大鼠平均動脈壓。I、腹腔灌洗并回收腹腔

4、灌洗液（回收率≥80%），ELISA法測定細胞因子IL-1、IL-6、TNF-α、IL-10的濃度。II、腹主動脈取血行血培養(yǎng)、分離中性粒細胞通過流式細胞儀檢測中性粒細胞表面TLR4表達；Transwell小室法測中性粒細胞體外趨化個數(shù)。III、動物處死后，留取遠端空腸組織約2cm行HE染色，光鏡下觀察組織病理形態(tài)變化。IV、另留取距離十二指腸球部遠端10cm處空腸組織約2cm，勻漿后通過ELISA測細胞因子（IL-1、IL-6、TNF

5、-α、IL-10）和粘附分子（ICAM-1、VCAM-1）的濃度。
　　結(jié)果：
　　（1）平均動脈壓及血培養(yǎng)：與空白組比較，膿毒癥組、PA-膿毒癥組、嚴重膿毒癥組、PA-嚴重膿毒癥組4組平均動脈壓明顯降低。空白組血培養(yǎng)無細菌生長；其余4組血培養(yǎng)結(jié)果均為大腸埃希菌（+）。
　　（2）病理學(xué)改變：解剖后，空白組腸管呈粉紅色，血供良好；其余4組均有不同程度腸壁色澤變暗、充血、水腫、積氣或粘連。石蠟切片HE染色：空白組腸上皮細

6、胞完整，上皮和固有層連接緊密無縫隙，無炎癥細胞浸潤，腸腺體正常；其余4組均有不同程度的上皮細胞破壞、炎細胞浸潤、固有層水腫和毛細血管擴張。
　?。?）腹腔灌洗液細胞因子濃度：
　?、俅傺滓蜃樱↖L-1、IL-6、TNF-α）濃度：與空白組比較，膿毒癥組、PA-膿毒癥組、嚴重膿毒癥組、PA-嚴重膿毒癥組促炎因子濃度均升高（P＜0.05）；其中嚴重膿毒癥組高于膿毒癥組（P＜0.05）；膿毒癥組高于PA-膿毒癥組（P＜0.05）；

7、嚴重膿毒癥組高于PA-嚴重膿毒癥組（P＜0.05）。
　?、谝盅滓蜃樱↖L-10）濃度：與空白組比較，膿毒癥組、PA-膿毒癥組、嚴重膿毒癥組、PA-嚴重膿毒癥組均升高（P＜0.05）；進一步比較，膿毒癥組IL-10濃度高于PA-膿毒癥組（P＜0.05）；嚴重膿毒癥組高于PA-嚴重膿毒癥組（P＜0.05）。
　?。?）腸組織細胞因子和粘附分子濃度：
　　①促炎因子（IL-1、IL-6、TNF-α）濃度：與正常組比較，膿毒

8、癥組、PA-膿毒癥組、嚴重膿毒癥組、PA-嚴重膿毒癥組促炎因子濃度均升高（P＜0.05）；其中嚴重膿毒癥組高于膿毒癥組（P＜0.05）；膿毒癥組高于PA-膿毒癥組（P＜0.05）；嚴重膿毒癥組高于PA-嚴重膿毒癥組（P＜0.05）。
　?、谝盅滓蜃樱↖L-10）濃度：與正常組比較，膿毒癥組、PA-膿毒癥組、嚴重膿毒癥組、PA-嚴重膿毒癥組均升高（P＜0.05）；膿毒癥組IL-10濃度低于PA-膿毒癥組（P＜0.05）；嚴重膿毒癥組

9、低于PA-嚴重膿毒癥組（P＜0.05）。
　?、奂毎掣椒肿樱↖CAM-1、VCAM-1）濃度：與空白組相比，膿毒癥組、PA-膿毒癥組、嚴重膿毒癥組、PA-嚴重膿毒癥組腸道ICAM-1、VCAM-1濃度均升高（P＜0.05）；其中膿毒癥組ICAM-1、VCAM-1表達濃度高于PA-膿毒癥組（P＜0.05）；但嚴重膿毒癥組VCAM-1表達水平與PA-嚴重膿毒癥組相比無明顯變化（P=0.262）。
　?。?）流式細胞儀檢測外周血

10、中性粒細胞表面TLR4表達：與空白組比較，膿毒癥組、PA-膿毒癥組、嚴重膿毒癥組、PA-嚴重膿毒癥組TLR4表達均升高（P＜0.05）；膿毒癥組TLR4表達低于嚴重膿毒癥組；膿毒癥組高于PA-膿毒癥組（P＜0.05）；嚴重膿毒癥組高于PA-嚴重膿毒癥組（P＜0.05）。
　　（6）Transwell小室法測中性粒細胞體外趨化個數(shù)：與空白組比較，膿毒癥組、PA-膿毒癥組、嚴重膿毒癥組、PA-嚴重膿毒癥組中性粒細胞體外趨化個數(shù)均減少（

11、P＜0.05）；嚴重膿毒癥組趨化個數(shù)少于膿毒癥組（P＜0.05）；膿毒癥組個數(shù)少于PA-膿毒癥組（P＜0.05）；嚴重膿毒癥組個數(shù)少于PA-嚴重膿毒癥組（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、腹腔感染引起的膿毒癥/嚴重膿毒癥可導(dǎo)致大鼠腹腔、腸道局部細胞因子水平升高；PA-MSHA預(yù)處理可通過降低局部細胞因子濃度，減輕膿毒癥大鼠腸道炎癥損害，預(yù)防膿毒癥。
　　2、腹腔感染引起的膿毒癥/嚴重膿毒癥均可使大鼠腸道ICAM-1

12、、VCAM-1表達水平升高；PA-MSHA預(yù)給藥能通過抑制膿毒癥大鼠腸道ICAM-1、VCAM-1的表達水平，從而在一定程度上減輕、中度膿毒癥大鼠腸道炎癥反應(yīng)。
　　3、PA-MSHA預(yù)給藥能抑制中性粒細胞表面TLR4及其下游信號通路的表達，改善中性粒細胞免疫麻痹，增加中性粒細胞體外移行個數(shù)，從而降低全身炎癥水平，減少組織損傷。
　　4、PA-MSHA預(yù)給藥能通過減輕全身和局部（腹腔、腸道）炎癥反應(yīng)，從而對膿毒癥引起的腸道損