類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者TH17細(xì)胞及其相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)及臨床意義.pdf

1、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)是我國(guó)高發(fā)的一種以關(guān)節(jié)滑膜炎為特征的慢性全身性自身免疫性疾病。以關(guān)節(jié)滑膜炎及漿膜、心肺、皮膚、眼、血管等結(jié)締組織廣泛性炎癥為主要表現(xiàn),滑膜炎持久反復(fù)發(fā)作,可導(dǎo)致關(guān)節(jié)內(nèi)軟骨和骨的破壞,關(guān)節(jié)功能障礙,肢體嚴(yán)重畸形,甚至致殘,在我國(guó)RA的患病率約為0.4％。RA的病因尚不明確,可能為遺傳、環(huán)境、感染和免疫等因素共同作用的結(jié)果。目前的主要治療原則是使患者獲得盡可能長(zhǎng)的完全緩解期,以非甾體抗炎藥、免疫抑制劑、抗風(fēng)濕類藥等為主

2、,對(duì)肝腎功能有損傷,因此更需要明確RA的病因及探索其新的治療靶點(diǎn)。
　　 TH17細(xì)胞為新發(fā)現(xiàn)的CD4+T細(xì)胞亞群,作為一個(gè)新型的輔助性T細(xì)胞亞群,具有獨(dú)立的分化和發(fā)育調(diào)節(jié)機(jī)制,能產(chǎn)生IL-17A,IL-17F和IL-22等細(xì)胞因子。高水平分泌的IL-17A是TH17細(xì)胞標(biāo)志的細(xì)胞因子。動(dòng)物試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),TH17細(xì)胞在自身免疫性疾病和感染性疾病中發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用。同時(shí)有資料顯示,一些自身免疫病患者,如多發(fā)性硬化、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、炎性

3、腸病和銀屑病等存在著TH17細(xì)胞數(shù)量和(或)功能異常。
　　 本實(shí)驗(yàn)通過研究Th17細(xì)胞及其相關(guān)細(xì)胞因子在RA患者中的表達(dá)水平并探討其臨床意義,可能會(huì)對(duì)闡明RA的發(fā)病機(jī)制及探索新的靶向治療起到一定的積極作用。
　　 第一節(jié):RA患者外周血TH17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)水平
　　 目的:通過檢測(cè)血清中IL-17A的含量及外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)中IL-17AmRNA的表達(dá)水平,研究其與疾病活動(dòng)程度的關(guān)系,闡述T

4、H17細(xì)胞在RA發(fā)病中的作用。
　　 方法:收集初診確診為活動(dòng)期RA患者32例,男7例,女25例,平均年齡51±6歲;另設(shè)健康對(duì)照組30例,男9例,女21例,平均年齡47±4歲。應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)及反轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)法,分別檢測(cè)外周血血清中IL-17A水平和外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)中IL-17AmRNA表達(dá)水平。
　　 結(jié)果:活動(dòng)期RA患者血清中IL-17A水平(15.76±0.62)pg/m

5、l與健康對(duì)照組(8.67±0.12)pg/ml比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.82,P＜0.05);活動(dòng)期RA患者PBMC的IL-17AmRNA表達(dá)水平(1.94±0.46)與健康對(duì)照組(0.84±0.16)比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.58,P＜0.05);RA組血清IL-17A水平與mRNA表達(dá)水平呈正相關(guān)(r=0.7,P＜0.05),且與疾病活動(dòng)程度(DAS28)評(píng)分呈正相關(guān)(r=0.99,P＜0.05)。
　　 結(jié)論:

6、活動(dòng)期RA患者體內(nèi)PBMC的IL-17AmRNA表達(dá)水平及TH17細(xì)胞的主要效應(yīng)性細(xì)胞因子IL-17A水平明顯升高并與疾病活動(dòng)程度呈正相關(guān)。
　　 第二節(jié):RA患者外周血TH17細(xì)胞數(shù)量
　　 目的:通過檢測(cè)RA患者外周血CD4+IL-17+T細(xì)的比例,確定RA患者外周血TH17細(xì)胞的數(shù)量,研究其與疾病活動(dòng)程度的關(guān)系。
　　 方法:病例組及對(duì)照組選擇同第一節(jié)。以Ficoll密度梯度離心法分離外周血單個(gè)核細(xì)胞(PB

7、MC),一組不加刺激,另一組用(50ng/ml)佛波酯和(1ug/ml)離子霉素刺激4小時(shí)后,以抗CD4-PE和抗IL-17-FITC標(biāo)記,流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD4+IL-17+T細(xì)胞的數(shù)量。
　　 結(jié)果:活動(dòng)期RA患者外周血CD4+IL-17+T細(xì)胞比例(2.50±0.54)%與正常對(duì)照組(0.03±0.00)%比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=5.82,P＜0.01);但刺激組(3.23±0.53)與非刺激組(2.50±0.54)比較