SOCS3促潰瘍性結(jié)腸炎腸道炎癥復(fù)發(fā)的機(jī)制研究.pdf

1、目的:潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis，UC)是炎癥性腸病(inflammatory boweldisease，IBD)的一種，其病因尚不明確。經(jīng)免疫調(diào)節(jié)治療患者可獲得病情緩解，但多數(shù)患者出現(xiàn)腸道炎癥的反復(fù)發(fā)作。前期研究發(fā)現(xiàn)，潰瘍性結(jié)腸炎患者活動(dòng)期及緩解期腸黏膜中細(xì)胞因子信號(hào)抑制蛋白-3(suppressor of cytokine signaling-3，SOCS3)陽(yáng)性腸上皮細(xì)胞的數(shù)量較正常人腸黏膜中明顯增多，進(jìn)一

2、步研究發(fā)現(xiàn)完全緩解期（臨床緩解，內(nèi)鏡緩解及組織學(xué)緩解）的潰瘍性結(jié)腸炎患者腸上皮細(xì)胞中SOCS3的表達(dá)量與緩解期的長(zhǎng)短相關(guān)，即上皮細(xì)胞SOCS3表達(dá)量越高，患者緩解期越短，提示SOCS3表達(dá)量的檢測(cè)有利于對(duì)疾病復(fù)發(fā)預(yù)測(cè)，腸上皮細(xì)胞SOCS3高表達(dá)可能是潰瘍性結(jié)腸炎復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)因素。SOCS3促進(jìn)潰瘍性結(jié)腸炎復(fù)發(fā)分子機(jī)制的探究不僅有助于對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎致病機(jī)制的理解，而且可能為潰瘍性結(jié)腸炎緩解期的維持提供新的治療策略。近期，IL-22/STAT

3、3信號(hào)通路在腸黏膜屏障穩(wěn)態(tài)維持中的重要作用逐漸被揭示，而SOCS3是STAT3的經(jīng)典靶蛋白，可反饋抑制STAT3活性。潰瘍性結(jié)腸炎患者緩解期腸黏膜較正常人脆弱，我們假設(shè)IL-22/STAT3信號(hào)通路在潰瘍性結(jié)腸炎緩解期可能發(fā)揮重要作用，SOCS3高表達(dá)可能通過(guò)削弱該通路的黏膜保護(hù)作用促進(jìn)腸道炎癥的復(fù)發(fā)。
　　方法:收集處于完全緩解期的潰瘍性結(jié)腸炎患者及正常人腸黏膜組織標(biāo)本，免疫組化檢測(cè)標(biāo)本中IL-22及IL-22/STAT3信號(hào)通

4、路下游蛋白c-Myc，Survivin的表達(dá)。構(gòu)建SOCS3真核表達(dá)載體及SOCS3穩(wěn)定過(guò)表達(dá)的HCT-116，HT-29腸上皮細(xì)胞株(116-SOCS3，29-SOCS3)。CCK-8檢測(cè)SOCS3過(guò)表達(dá)對(duì)IL-22促腸上皮細(xì)胞增殖作用的影響。劃痕實(shí)驗(yàn)(wounding assay)檢測(cè)SOCS3過(guò)表達(dá)對(duì)IL-22促腸上皮損傷修復(fù)作用的影響。實(shí)時(shí)定量PCR，Westernblot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)SOCS3過(guò)表達(dá)及STAT3敲除對(duì)IL-22誘導(dǎo)

5、STAT3活化及腸上皮細(xì)胞表達(dá)抗菌肽、增殖凋亡相關(guān)蛋白(Bcl-2，c-Myc，Survivin，Bcl-xL)的影響。此外，利用糖原染色及實(shí)時(shí)定量實(shí)驗(yàn)我們檢測(cè)了SOCS3過(guò)表達(dá)對(duì)腸上皮細(xì)胞黏液素(MUC1)表達(dá)的影響。Westernb lot檢測(cè)SOCS3過(guò)表達(dá)對(duì)IL-6，IL-13和IL-22介導(dǎo)的STAT1，STAT3，STAT6，ERK和AKT等信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響
　　結(jié)果:潰瘍性結(jié)腸炎患者緩解期腸黏膜中IL-22陽(yáng)性炎癥

6、細(xì)胞的數(shù)量較正常人明顯增多，但腸上皮細(xì)胞c-Myc及Survivin的表達(dá)量與正常人無(wú)顯著差異。SOCS3可抑制IL-22誘導(dǎo)的腸上皮細(xì)胞增殖。SOCS3可削弱IL-22的促腸上皮損傷修復(fù)作用。SOCS3可減弱甚至阻斷IL-22對(duì)上皮細(xì)胞STAT3信號(hào)通路的激活，并抑制IL-22/S TAT3誘導(dǎo)的抗菌肽、增殖凋亡相關(guān)蛋白(Bcl-2，c-Myc，S urvivin)的表達(dá)。SOCS3過(guò)表達(dá)可抑制腸上皮細(xì)胞黏液素(MUC1)的產(chǎn)生。SO