生物節(jié)律蛋白RORb在胃癌中的表達研究.pdf

1、胃癌是全世界最常見的消化道惡性腫瘤之一，胃癌在全世界范圍內死亡率在所有惡性腫瘤中排名第三。一項大樣本普查資料表明，我國胃癌死亡率在所有惡性腫瘤中排名第三。胃癌的發(fā)生受多因素影響，但其具體發(fā)病機制仍不明確。進展期胃癌預后不佳，目前治療上仍存在嚴峻挑戰(zhàn)，近期幾項針對胃癌的靶向治療試驗均以失敗告終。因此尋找新的胃癌早期診斷分子生物學指標和潛在治療靶點，對改善胃癌預后和提高患者生存率具有重要意義。
　　ROR全名維甲酸相關孤核受體，是核受

2、體大家族的亞家族之一，由RORa、RORb、RORc三大亞型構成。ROR在哺乳動物的發(fā)育、免疫、生物節(jié)律、細胞代謝等方面均起到了關鍵作用，其中對生物節(jié)律的調節(jié)起作用的主要是RORb。另外，ROR家族與腫瘤也有密不可分的聯(lián)系，主要體現(xiàn)在RORc缺陷增加淋巴瘤的易感性。截至目前，我們檢索發(fā)現(xiàn)有一篇報道涉及RORb與腫瘤相關性，該研究表明與正常乳房組織相比，RORb在乳腺癌旁組織中表達抑制。而目前關于胃癌與RORb相關性的研究暫無報道。

3、>　　目的：
　　本研究擬在先前大腸癌與RORb的研究基礎上，分析RORb在胃癌中的表達情況，研究RORb過表達對SGC胃癌細胞成瘤能力的影響;探討RORb在胃癌中表達的分子機制，為胃癌的靶向治療提供基礎。
　　方法：
　　1、Real-time RCR檢測34例胃癌臨床樣本的RORb mRNA表達。
　　2、通過將RORb-pReceiver重組質粒瞬時轉染入胃癌SGC7901細胞系，并用G418(遺傳霉素)篩

4、選耐藥細胞，并用有限稀釋克隆法篩選出穩(wěn)定過表達RORb蛋白，經(jīng)western blot驗證目的蛋白表達強陽性后，注射入裸鼠皮下，構建裸鼠成瘤模型。研究過表達RORb的胃癌細胞成瘤能力是否下降。
　　3、基因芯片分析RORb過表達胃癌細胞的基因表達譜。
　　4、基因芯片的結果用DAVID軟件進行GO分析。
　　結果：
　　5、RORb在胃癌組織中表達下調:Real-time PCR發(fā)現(xiàn)mRNA在胃癌組織較癌旁組織、

5、正常組織表達均顯著下調。
　　6、RORb過表達胃癌細胞在裸鼠體內瘤體平均體積小于對照組胃癌細胞瘤體平均體積。
　　7、經(jīng)Human Genome U133 Plus2.0 Array基因表達譜芯片分析，RORb過表達組和對照組之間有460個差異表達基因，其中表達上調的有177個基因，表達下調的有283個基因，其中凋亡促進因子BCL2L11(BCL2L11)表達上調了5.08倍，5號染色體開放閱讀框36(C5orf36)表達