生物節(jié)律蛋白R(shí)ORb在胃癌中的表達(dá)研究.pdf

1、胃癌是全世界最常見的消化道惡性腫瘤之一，胃癌在全世界范圍內(nèi)死亡率在所有惡性腫瘤中排名第三。一項(xiàng)大樣本普查資料表明，我國(guó)胃癌死亡率在所有惡性腫瘤中排名第三。胃癌的發(fā)生受多因素影響，但其具體發(fā)病機(jī)制仍不明確。進(jìn)展期胃癌預(yù)后不佳，目前治療上仍存在嚴(yán)峻挑戰(zhàn)，近期幾項(xiàng)針對(duì)胃癌的靶向治療試驗(yàn)均以失敗告終。因此尋找新的胃癌早期診斷分子生物學(xué)指標(biāo)和潛在治療靶點(diǎn)，對(duì)改善胃癌預(yù)后和提高患者生存率具有重要意義。
　　ROR全名維甲酸相關(guān)孤核受體，是核受

2、體大家族的亞家族之一，由RORa、RORb、RORc三大亞型構(gòu)成。ROR在哺乳動(dòng)物的發(fā)育、免疫、生物節(jié)律、細(xì)胞代謝等方面均起到了關(guān)鍵作用，其中對(duì)生物節(jié)律的調(diào)節(jié)起作用的主要是RORb。另外，ROR家族與腫瘤也有密不可分的聯(lián)系，主要體現(xiàn)在RORc缺陷增加淋巴瘤的易感性。截至目前，我們檢索發(fā)現(xiàn)有一篇報(bào)道涉及RORb與腫瘤相關(guān)性，該研究表明與正常乳房組織相比，RORb在乳腺癌旁組織中表達(dá)抑制。而目前關(guān)于胃癌與RORb相關(guān)性的研究暫無(wú)報(bào)道。

3、>　　目的：
　　本研究擬在先前大腸癌與RORb的研究基礎(chǔ)上，分析RORb在胃癌中的表達(dá)情況，研究RORb過表達(dá)對(duì)SGC胃癌細(xì)胞成瘤能力的影響;探討RORb在胃癌中表達(dá)的分子機(jī)制，為胃癌的靶向治療提供基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1、Real-time RCR檢測(cè)34例胃癌臨床樣本的RORb mRNA表達(dá)。
　　2、通過將RORb-pReceiver重組質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染入胃癌SGC7901細(xì)胞系，并用G418(遺傳霉素)篩

4、選耐藥細(xì)胞，并用有限稀釋克隆法篩選出穩(wěn)定過表達(dá)RORb蛋白，經(jīng)western blot驗(yàn)證目的蛋白表達(dá)強(qiáng)陽(yáng)性后，注射入裸鼠皮下，構(gòu)建裸鼠成瘤模型。研究過表達(dá)RORb的胃癌細(xì)胞成瘤能力是否下降。
　　3、基因芯片分析RORb過表達(dá)胃癌細(xì)胞的基因表達(dá)譜。
　　4、基因芯片的結(jié)果用DAVID軟件進(jìn)行GO分析。
　　結(jié)果：
　　5、RORb在胃癌組織中表達(dá)下調(diào):Real-time PCR發(fā)現(xiàn)mRNA在胃癌組織較癌旁組織、

5、正常組織表達(dá)均顯著下調(diào)。
　　6、RORb過表達(dá)胃癌細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)瘤體平均體積小于對(duì)照組胃癌細(xì)胞瘤體平均體積。
　　7、經(jīng)Human Genome U133 Plus2.0 Array基因表達(dá)譜芯片分析，RORb過表達(dá)組和對(duì)照組之間有460個(gè)差異表達(dá)基因，其中表達(dá)上調(diào)的有177個(gè)基因，表達(dá)下調(diào)的有283個(gè)基因，其中凋亡促進(jìn)因子BCL2L11(BCL2L11)表達(dá)上調(diào)了5.08倍，5號(hào)染色體開放閱讀框36(C5orf36)表達(dá)