單核-巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞抗問號鉤端螺旋體感染能力差異及機(jī)制研究.pdf

1、背景及意義:鉤端螺旋體?。↙eptospirosis，鉤體?。┦且环N由致病性鉤端螺旋體（簡稱鉤體）感染所引起的全球分布的人獸共患傳染病，也是我國重點(diǎn)監(jiān)控和防疫的主要傳染病之一。問號鉤端螺旋體（Leptospira interrogans）黃疸出血群賴株為我國流行最廣的致病菌。單核-巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞是固有免疫中兩種主要的吞噬細(xì)胞，在抵御病原菌感染時起著重要作用。然而，在鉤體感染宿主過程中，上述兩種吞噬細(xì)胞對鉤體的吞噬、殺滅作用及其機(jī)制

2、尚未完全闡明，本文探索了在問號鉤體感染過程中，單核-巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞吞噬、殺滅鉤體的差異及其機(jī)制。
　　方法:采用免疫組化檢測鉤體感染C3H/HeJ小鼠后肺、肝、腎組織中外周血來源的單核-巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的浸潤。采用HE染色法檢測鉤體感染小鼠肺、肝、腎組織中的病理變化。采用蛋白芯片檢測感染小鼠或鉤體病病人血清中趨化因子的變化。采用免疫組化檢測感染小鼠肺、肝、腎組織中粘附因子（VCAM-1、E-選擇素、P-選擇素和ICAM-

3、1）的表達(dá)水平。建立問號鉤體黃疸出血群賴型賴株感染人THP-1單核-巨噬細(xì)胞、人外周血單核-巨噬細(xì)胞、小鼠J774A.1巨噬細(xì)胞、小鼠外周血單核-巨噬細(xì)胞、人HL-60中性粒細(xì)胞、人外周血中性粒細(xì)胞和小鼠外周血中性粒細(xì)胞模型。采用激光共聚焦顯微鏡技術(shù)檢測感染過程中不同吞噬細(xì)胞吞噬鉤體的能力。采用細(xì)菌計(jì)數(shù)板定量檢測感染過程中不同吞噬細(xì)胞內(nèi)鉤體的數(shù)量。采用激光共聚焦顯微鏡技術(shù)檢測感染過程中胞內(nèi)鉤體活力。采用
　　熒光分光光度法檢測不同

4、吞噬細(xì)胞對鉤體的殺滅能力。胞內(nèi)鉤體的存活情況和體外培養(yǎng)的生長情況分別由細(xì)菌菌落計(jì)數(shù)和細(xì)菌計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)檢測。采用激光共聚焦顯微鏡技術(shù)檢測不同吞噬細(xì)胞內(nèi)鉤體與溶酶體共定位率。不同吞噬細(xì)胞內(nèi)總活性氧(ROS)、一氧化氮(NO)和游離Ca2+濃度([Ca2+]i)在感染過程中的變化和對鉤體死亡率的影響分別由激光共聚焦顯微鏡技術(shù)和熒光分光光度法檢測。
　　結(jié)果:問號鉤體賴株感染C3H/HeJ小鼠后，肺、肝、腎組織中出現(xiàn)大量外周血來源的單核-巨

5、噬細(xì)胞浸潤，而在上述組織中只檢測到少量的中性粒細(xì)胞浸潤。在感染小鼠或鉤體病病人血清中單核-巨噬細(xì)胞趨化因子與正常小鼠或人相比顯著升高(p＜0.05)。而中性粒細(xì)胞趨化因子水平無顯著變化。同時，感染小鼠肺、肝、腎組織內(nèi)血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附因子（VCAM-1、E-選擇素和P-選擇素）與正常小鼠相比顯著升高(p＜0.05)，而ICAM-1與正常小鼠相比無顯著變化。人或小鼠單核-巨噬細(xì)胞（人THP-1單核-巨噬細(xì)胞、人外周血單核-巨噬細(xì)胞、小鼠J7

6、74A.1巨噬細(xì)胞和小鼠外周血單核-巨噬細(xì)胞）吞噬與殺滅鉤體的能力顯著強(qiáng)于相應(yīng)的中性粒細(xì)胞（HL-60中性粒細(xì)胞、人外周血中性粒細(xì)胞和小鼠外周血中性粒細(xì)胞）(p＜0.05)。鉤體感染過程中人或小鼠單核-巨噬細(xì)胞內(nèi)總ROS、NO水平和[Ca2+]i顯著高于相應(yīng)的中性粒細(xì)胞(p＜0.05)，抑制細(xì)胞內(nèi)總ROS、 NO、游離Ca2+后會顯著降低胞內(nèi)鉤體的死亡率(p＜0.05)。人或小鼠單核-巨噬細(xì)胞內(nèi)鉤體與溶酶體的共定位率顯著高于相應(yīng)的中性粒