鉤端螺旋體脂多糖誘生炎性細(xì)胞因子及小鼠感染組織中單核-巨噬細(xì)胞浸潤(rùn).pdf

1、目的：了解問號(hào)鉤端螺旋體（Leptospira interrogans）脂多糖（lipopolysaccharide，L-LPS）誘生人單核細(xì)胞或小鼠單核-巨噬細(xì)胞產(chǎn)生炎性細(xì)胞因子的作用以及問號(hào)鉤端螺旋體感染小鼠內(nèi)臟組織中外周血單核-巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)的情況。
　　方法：采用酚水法提取問號(hào)鉤端螺旋體黃疸出血群賴型賴株L-LPS，分別用LPS定量試劑盒和鱟試驗(yàn)試劑盒測(cè)定L-LPS濃度和內(nèi)毒素活性。采用人或小鼠細(xì)胞因子抗體芯片，檢測(cè)人THP

2、-1單核細(xì)胞或小鼠J774A.1單核-巨噬細(xì)胞受L-LPS作用或被問號(hào)鉤端螺旋體賴株感染24或48 h后產(chǎn)生細(xì)胞因子情況。采用小鼠細(xì)胞因子抗體芯片檢測(cè)問號(hào)鉤端螺旋體賴株感染C3H/HeJ小鼠血清細(xì)胞因子。以兔抗小鼠外周血單核-巨噬細(xì)胞特異性CD68-IgG為一抗、HRP標(biāo)記驢抗兔IgG為二抗，采用免疫組化法檢測(cè)C3H/HeJ小鼠感染問號(hào)鉤端螺旋體賴株5、7或10 d后肺、肝、腎組織中外周血來源的CD68+單核-巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)情況。

3、>　　結(jié)果：1×109問號(hào)鉤端螺旋體黃疸出血群賴型賴株可提取約1μg的L-LPS。L-LPS凝固鱟試劑所需最低濃度為0.5ng/mL，為大腸埃希菌脂多糖(E-LPS)活性1/5(0.1ng/mL)。L-LPS作用THP-1細(xì)胞24或48h后有29種細(xì)胞因子水平顯著升高，其中嗜酸細(xì)胞活化趨化因子(eotaxin)、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)、細(xì)胞間粘附分子-1(ICAM-1)、單核細(xì)胞趨化因子（1-309）、白細(xì)胞介素-

4、1α(IL-1α)、IL-6、IL-12p40、單核細(xì)胞趨化蛋白-2（MCP-2）、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和干擾素γ誘導(dǎo)單核因子(MIG)10種細(xì)胞因子水平升高5倍以上(p＜0.01)，eotaxin-2、IFN-γ、IL-3、IL-10、IL-11、IL-12p70、MCP-1、巨噬細(xì)胞炎性蛋白-1β(MIP-1β)、G-CSF、IL-1β、IL-7、IL-13、IL-15、干擾素誘導(dǎo)蛋白-10(IP-10)、M-CSF、MI

5、P-1δ、TGF-β1、可溶性TNF受體Ⅰ(sTNF RⅠ)和血小板衍生生長(zhǎng)因子-BB(PDGF-BB)19種細(xì)胞因子水平升高1.5～＜5倍(p＜0.05)。L-LPS作用J774A.1細(xì)胞24或48 h后有9種細(xì)胞因子水平升高，其中G-CSF、IL-6、IL-10、TNF-α、T細(xì)胞和單核及嗜酸性粒細(xì)胞CC亞族趨化因子(RANTES)5種細(xì)胞因子水平升高5倍以上(p＜0.01)，MCP-1、IL-12p40、IL-1β和可溶性TNF受

6、體Ⅱ(sTNF RⅡ)4種細(xì)胞因子水平升高升高1.5～＜5倍(p＜0.05)。問號(hào)鉤端螺旋體賴株感染細(xì)胞上清以及問號(hào)鉤端螺旋體賴株感染小鼠血清中細(xì)胞因子檢測(cè)結(jié)果與上述L-LPS作用細(xì)胞相似。問號(hào)鉤端螺旋體賴株感染C3H/HeJ小鼠5d后肺、肝和腎組織中出現(xiàn)CD68+單核-巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)，感染7或10d時(shí)上述組織內(nèi)CD68+單核-巨噬細(xì)胞數(shù)量不斷增加，肺和腎組織出現(xiàn)結(jié)構(gòu)模糊、細(xì)胞裂解等組織破壞現(xiàn)象。
　　結(jié)論：L-LPS具有很強(qiáng)的誘導(dǎo)