問號鉤端螺旋體對體外培養(yǎng)的吞噬和非吞噬細(xì)胞株的不同感染的研究.pdf

1、鉤端螺旋體(簡稱鉤體)是細(xì)長、螺旋狀的細(xì)菌，分為致病性的問號鉤體(Leptospira interrogans)(至少十二種)和腐生性的雙曲鉤體(Leptospra biflexa)(至少四種)兩大類。鉤端螺旋體病(Leptospirosis，簡稱鉤體病)則是由致病性鉤體引起的全世界傳播的人獸共患病，我國也是鉤體病的主要流行疫區(qū)之一。人類通常由于職業(yè)或者馴養(yǎng)等原因直接或通過被污染的水或土壤間接接觸帶菌動物的尿液，由此，鉤體通過小傷口甚或

2、完整的皮膚粘膜進(jìn)入人體，經(jīng)血液循環(huán)系統(tǒng)播散到肺，肝，腎等器官。因個體免疫水平的差異及受染菌株的不同，鉤體病臨床表現(xiàn)輕重不一，典型者出現(xiàn)嚴(yán)重的以黃疸、結(jié)膜充血和腎衰為特征的weil’s綜合癥。動物感染鉤體后通常不發(fā)病，而成為無癥狀攜帶者，其腎小管中的鉤體可隨尿液脫落而污染環(huán)境。因此宿主的腎臟帶菌狀態(tài)是鉤體病持續(xù)和流行的一個非常關(guān)鍵的核心環(huán)節(jié)。為了進(jìn)一步了解鉤體的侵襲性及其腎臟生存，在本研究中，我們選取HEK293、J774A.1、和COS

3、-7等三株代表性的細(xì)胞和強(qiáng)毒力的問號鉤體賴株作為研究對象，對鉤體感染的細(xì)胞進(jìn)行一系列的透射電鏡，免疫熒光顯微鏡，激光共聚焦顯微鏡觀察及western blot分析。我們的結(jié)果表明強(qiáng)毒力的問號鉤體賴株能在不影響細(xì)胞緊密連接(緊密粘連蛋白1)的情況下穿入HEK293細(xì)胞；而腐生型的雙曲鉤體則不能主動穿過而是被HEK293細(xì)胞吞噬形成吞噬體，并伴有緊密粘連蛋白1表達(dá)量的下降及密度的降低。我們還發(fā)現(xiàn)強(qiáng)毒力的問號鉤體賴株能以菌體一端或兩端黏附于J

4、774A.1細(xì)胞，其中大約80％黏附的鉤體被吞噬形成吞噬體；含鉤體的吞噬體能在胞內(nèi)進(jìn)一步成熟并與晚期內(nèi)體/溶酶體共區(qū)域化；此外，透射電鏡結(jié)果顯示含鉤體的吞噬體的成熟過程符合Desjardins等提出的“kiss-and-run”機(jī)制。此外，我們發(fā)現(xiàn)黏附到COS-7細(xì)胞的強(qiáng)毒力的問號鉤體賴株只有大約40％能被吞噬形成吞噬體，吞噬體內(nèi)的鉤體后來似乎能從吞噬體逃逸/被釋放到胞漿中呈游離狀態(tài)。盡管一副完整的有關(guān)鉤體致病因子的圖畫仍需繪制，我們的