滋養(yǎng)細胞抗原肽結(jié)合熱休克蛋白70作為新型避孕疫苗在小鼠模型中的研究.pdf

1、目的：
　　近年來應(yīng)用免疫學理論與技術(shù)開發(fā)新型避孕疫苗已引起了生殖醫(yī)學家和免疫學家的共同關(guān)注，然而，目前尚無高效安全的避孕疫苗。胎盤作為一個有研究前景的妊娠期間特殊的臨時器官，認為其主要的細胞——滋養(yǎng)層細胞可以作為一個靶向作用目標。在本研究中，我們試圖開發(fā)一種避孕的新途徑，以小鼠為實驗對象，我們應(yīng)用熱休克蛋白70（HSP70）-滋養(yǎng)細胞抗原肽復(fù)合物誘導(dǎo)母體免疫細胞的免疫激活，導(dǎo)致母體T細胞產(chǎn)生對胎盤滋養(yǎng)層細胞的免疫攻擊，有效終止妊

2、娠從而避孕。
　　方法：
　　1、體外實驗：
　　HSP70-滋養(yǎng)細胞抗原肽復(fù)合物與脾臟 T細胞共培養(yǎng)，設(shè)置對照組。（1）觀察 T細胞是否增殖和產(chǎn)生的細胞因子 IL-2和 IFN-γ水平。（2）通過比較滋養(yǎng)細胞抗原肽和不同組織來源抗原肽的免疫誘導(dǎo)，觀察激活的T細胞是否具有滋養(yǎng)細胞特異性。（3）通過檢測Y染色體上的UTY和SMCY基因，明確雄性或雌性胚胎來源的滋養(yǎng)層細胞，并分別制備相應(yīng)的抗原肽激活T細胞，檢測兩種T細胞對

3、滋養(yǎng)層細胞的細胞毒性，確定滋養(yǎng)層細胞的何種成分能夠誘導(dǎo)上述的T細胞的活化。
　　2、動物模型：
　?。?）小鼠皮下注射Hsp70-滋養(yǎng)細胞抗原肽，設(shè)置對照組。7天后分離小鼠脾T細胞RT-PCR和real-time PCR方法檢測細胞因子的表達。
　?。?）將雌性BALB/c小鼠接種HSP70-滋養(yǎng)細胞抗原肽復(fù)合物，然后使其與BALB/c雄性交配，設(shè)置對照組，觀察兩組的生育情況。
　　3、人源性Hsp70-滋養(yǎng)細胞

4、抗原肽復(fù)合物的制備與對T細胞的活化作用：在足月（38周）妊娠的人類女性（N=6）的胎盤中分離滋養(yǎng)細胞，同樣的方法制備人源性HSP70滋養(yǎng)細胞抗原肽復(fù)合物，刺激母體T細胞，設(shè)置對照組，觀察細胞因子IFN-γ和IL-2是否增殖。
　　結(jié)果：
　　1、我們研究小鼠胎盤滋養(yǎng)層細胞衍生的抗原肽，體外與HSP70結(jié)合后，該復(fù)合物可在體外和體內(nèi)激活T細胞。
　　2、活化的T細胞向Th1型免疫偏離，使特定的滋養(yǎng)細胞溶解，從而導(dǎo)致妊娠的