氫水對急性馬尾綜合征大鼠神經(jīng)元損害抑制作用的實驗研究.pdf

1、馬尾綜合征目前尚無有效臨床治療方法，因其一旦出現(xiàn)，將迅速發(fā)生不可逆的神經(jīng)損害，錯過最佳手術(shù)時機(jī)后，即使手術(shù)解除馬尾壓迫，患者運動功能大多數(shù)能夠恢復(fù)，但大、小便、性功能及鞍區(qū)感覺障礙難以恢復(fù)，致殘率非常高，給患者本人造成了極大的痛苦，也給家庭和社會帶來沉重的負(fù)擔(dān)。由于馬尾綜合征的病理生理機(jī)制非常復(fù)雜，目前對該病的研究相對較少而且緩慢。有研究顯示，氧應(yīng)激反應(yīng)在神經(jīng)元凋亡中發(fā)揮重要作用，而氫氣的選擇性抗氧化效應(yīng)對氧應(yīng)激損傷具有潛在的應(yīng)用價值，

2、其在馬尾神經(jīng)壓迫后造成神經(jīng)元凋亡中是否具有抑制神經(jīng)元凋亡的作用尚無研究。研究氫氣是否能通過抗氧化應(yīng)激損傷而抑制或者延緩急性馬尾綜合征不可逆的神經(jīng)損害發(fā)生，并逐步研發(fā)新藥應(yīng)用于臨床治療馬尾綜合征，具有重要的理論及現(xiàn)實意義。
　　 本實驗研究將建立馬尾綜合征動物模型，通過動物行為學(xué)、組織病理學(xué)、免疫組化及統(tǒng)計學(xué)分析等多種方法，研究氫生理鹽水在急性馬尾綜合征中的抗氧化應(yīng)激反應(yīng)、抑制神經(jīng)元凋亡及神經(jīng)保護(hù)作用，并與臨床常用急性神經(jīng)損傷保護(hù)

3、藥物甲強(qiáng)龍進(jìn)行對比，為臨床治療馬尾綜合征提供基礎(chǔ)研究，為逐步研發(fā)新藥治療馬尾綜合征提供理論依據(jù)。
　　 目的：
　　 1.檢驗急性馬尾綜合征動物模型的可靠性，通過劑量梯度實驗初步證實氫生理鹽水對急性馬尾綜合征大鼠的氧化應(yīng)激反應(yīng)具有影響作用，并確定合適的使用劑量。
　　 2.通過動物行為學(xué)觀察，初步證實氫生理鹽水對急性馬尾綜合征大鼠的神經(jīng)損害具有抑制作用，并確定合理的實驗時間分組。
　　 3.研究急性馬尾綜

4、合征大鼠的氧化應(yīng)激反應(yīng)的變化規(guī)律及氫生理鹽水對氧化應(yīng)激反應(yīng)的抑制作用。
　　 4.研究氫生理鹽水治療后急性馬尾綜合征大鼠的組織病理、免疫組化等變化，證實氫生理鹽水可以抑制神經(jīng)元的凋亡，對急性馬尾壓迫導(dǎo)致神經(jīng)損害具有保護(hù)作用。
　　 5.通過與臨床藥物甲強(qiáng)龍進(jìn)行對比，評估氫生理鹽水的療效及應(yīng)用前景。
　　 方法：
　　 1.建立硅膠條壓迫馬尾的SD大鼠動物模型，并通過行為學(xué)評價、組織形態(tài)學(xué)觀察驗證該動物模型

5、可應(yīng)用于本實驗研究。
　　 2.分別使用2.5ml/kg、5ml/kg、7.5ml/kg 梯度劑量的氫生理鹽水腹腔注射，檢測大鼠的GSH 含量變化，確定氫生理鹽水的合適劑量,再分別于3h、6h、12h、24h 檢測GSH 含量變化，初步驗證氫生理鹽水對馬尾綜合征大鼠的氧化應(yīng)激反應(yīng)具有影響作用，并確定氫生理鹽水使用頻率。
　　 3.在3h、6h、12h、24h、48h、72h、1周、2周、3周、4周、8周、12周行BBB

6、評分和熱板實驗觀察行為學(xué)改變，證實氫生理鹽水對急性馬尾綜合征大鼠的神經(jīng)損害具有抑制作用，并根據(jù)變化規(guī)律確定較合理的動物實驗時間分組。
　　 4．分別于3h、6h、12h、24h、48h、72h 取T13-L1段脊髓、L4-L6 段馬尾神經(jīng)及L5、L6 雙側(cè)背根神經(jīng)節(jié)，行MDA及GSH 檢測。研究急性馬尾綜合征大鼠的氧化應(yīng)激反應(yīng)的變化規(guī)律，證實氫生理鹽水對氧化應(yīng)激反應(yīng)具有抑制作用。
　　 5．于48h 取T13-L1段脊髓

7、及L5、L6 雙側(cè)背根神經(jīng)節(jié)行HE、Caspases 3、Bax及Tunel 染色，取L4-L6 段馬尾神經(jīng)行NF 染色，證實氫生理鹽水可以抑制神經(jīng)元的凋亡，對急性馬尾壓迫導(dǎo)致神經(jīng)損害具有保護(hù)作用。
　　 6．通過動物行為學(xué)評價、MAD及GSH 檢測、HE、NF、Caspases 3、Bax及Tunel 染色等指標(biāo)對氫生理鹽水、甲強(qiáng)龍、氫水和甲強(qiáng)龍混合治療進(jìn)行對比，評估氫生理鹽水與甲強(qiáng)龍在急性馬尾綜合征神經(jīng)保護(hù)作用中的療效。

8、r>　　 結(jié)果：
　　 1.馬尾綜合征SD大鼠動物模型制模方便，死亡率低，可觀察到馬尾壓迫后大體病理變化，與對照組相比，各項行為學(xué)指標(biāo)均符合實驗所需。
　　 2.氫生理鹽水梯度劑量實驗，發(fā)現(xiàn)5ml/kg 劑量對GSH水平影響最大，確定氫水的用量為5ml/kg。而各時間組中，3h和6h組的GSH水平與壓迫組有明顯差異，而12h和24h組無明顯差異，由此考慮氫水代謝時間為6-12h 之間，確定氫水的使用頻次為1次/ 8h。

9、
　　 3.根據(jù)BBB 評分和熱板實驗結(jié)果，發(fā)現(xiàn)3h組因麻醉蘇醒時間不一致而結(jié)果差異太大，48h 至3月組BBB 評分和熱板實驗結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)差異，由此確定合適的實驗時間點分組為：6h、12h、24h、48h組。
　　 4.與壓迫組相比，氫生理鹽水組脊髓、馬尾及背根神經(jīng)節(jié)的MDA水平更低，GSH水平更高，具有統(tǒng)計學(xué)意義。壓迫3h組MDA及GSH 變化最大，氫生理鹽水24h組MDA及GSH 變化最大,均為48h 達(dá)到峰值，氫

10、生理鹽水推遲了氧化應(yīng)激反應(yīng)的加劇時間。
　　 5．與壓迫組相比，氫生理鹽水組HE 染色顯示出更好的組織形態(tài)，馬尾NF陽性率更高，而脊髓及背根神經(jīng)節(jié)的Caspases 3和Bax 陽性指數(shù)、Tunel細(xì)胞凋亡指數(shù)均更低，且具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 6．與壓迫組相比，BBB 評分和熱板實驗、MAD和GSH水平、HE、NF、Caspases 3、Bax及Tunel 染色等指標(biāo)，氫生理鹽水組、甲強(qiáng)龍組、氫水和甲強(qiáng)龍混合治療組均有明

11、顯的統(tǒng)計學(xué)意義改變，而氫生理鹽水組、甲強(qiáng)龍組、氫水和甲強(qiáng)龍混合治療組之間無明顯的統(tǒng)計學(xué)差異。
　　 結(jié)論：
　　 1.馬尾綜合征SD大鼠模型具有較好的耐受性，具備較好的可操作性與可重復(fù)性，較接近臨床的發(fā)病情況，能反映神經(jīng)受損的神經(jīng)生理和運動行為的情況。
　　 2.急性馬尾綜合征大鼠的氧化應(yīng)激反應(yīng)3h 變化最大，48h 達(dá)到峰值，氫生理鹽水對氧化應(yīng)激反應(yīng)具有抑制作用。
　　 3.氫生理鹽水對神經(jīng)元凋亡具有抑