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文檔簡介
1、第一章:ISSR分子標(biāo)記技術(shù)及其應(yīng)用 介紹簡單重復(fù)序列間擴(kuò)增(inter-simple sequence repeat,ISSR)分子標(biāo)記的原理、方法、特點(diǎn)及其在遺傳研究中的應(yīng)用。ISSR標(biāo)記技術(shù)可以快速、高效、靈敏地檢測基因組遺傳信息,在動(dòng)、植物遺傳研究中具有廣泛的應(yīng)用前景。 第二章:絨螯蟹ISSR-PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件的優(yōu)化 以絨螯蟹基因組DNA為材料,分析了DNA濃度、Mg<'2+>濃度、引物濃度、d
2、NTP濃度,以及引物的退火溫度對(duì)ISSR-PCR擴(kuò)增結(jié)果的影響,篩選出了擴(kuò)增穩(wěn)定、條帶清晰、多態(tài)性豐富的8條ISSR引物,建立了絨螯蟹ISSR-PCR的最佳反應(yīng)體系及PCR擴(kuò)增條件,為利用ISSR標(biāo)記技術(shù)開展絨螯蟹種群遺傳多樣性分析等工作奠定了基礎(chǔ)。 第三章用ISSR標(biāo)記檢測中國大陸7水系絨螯蟹種群的遺傳多樣性 用ISSR分子標(biāo)記探討了中國大陸7水系絨螯蟹(Mitten crab)的遺傳多樣性及其遺傳分化。在30條ISS
3、R引物中篩選了10條擴(kuò)增穩(wěn)定、條帶清晰、多態(tài)性高的引物。共獲得92條清晰條帶,其中61條具有多態(tài)性,多態(tài)條帶比(PPB)66.3%。各水系絨螯蟹的多態(tài)帶百分比在6.52%~58.70%之間,平均為32.14%。長江水系和湛江青年河水系絨螯蟹的遺傳多樣性較高,而閩江和甌江水系表現(xiàn)出的遺傳多樣性較低。7水系絨螯蟹種群之間表現(xiàn)出較高水平的遺傳分化(Gst=0.5802),南方3水系的絨螯蟹與北方4水系絨螯蟹之間的遺傳距離明顯大于南北方水系內(nèi)部
4、的遺傳距離。在UPMGA聚類樹上,南方3水系與北方4水系分化成兩大分支,對(duì)應(yīng)于中國大陸南方水系的合浦絨螯蟹和北方水系的中華絨螯蟹。來自甌江、遼河和鴨綠江3水系的個(gè)體(除2個(gè)體外)分別獨(dú)立聚成3個(gè)支系(OJ、LH、YLJ支),且這3支系又分別嵌套在長江水系絨螯蟹的支系之內(nèi),表明它們與長江水系種群有著密切的親緣關(guān)系,據(jù)此推測,這3個(gè)種群可能都來源于長江水系。此外,本文基于ISSR標(biāo)記技術(shù)對(duì)混入南方水系的2中華亞種單元型的分析,提出了中華絨螯
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