ISSR標(biāo)記的早熟禾遺傳多樣性分析.pdf

1、早熟禾（PoaL.）屬植物全世界有500多種，我國早熟禾資源也比較豐富，有78種8變種，廣泛分布于溫帶地區(qū)。因其具有較強(qiáng)的耐寒性、抗旱性，營養(yǎng)豐富、綠期長等特點(diǎn)，成為北方天然草地的優(yōu)良牧草和建植草坪的主要草種之一。本研究以應(yīng)用較為廣泛的草地早熟禾、硬質(zhì)早熟禾、冷地早熟禾、高原早熟禾、華灰早熟禾、野生早熟禾等31份材料為供試材料，應(yīng)用ISSR分子標(biāo)記技術(shù)，對早熟禾種質(zhì)資源遺傳多樣性進(jìn)行了研究，主要結(jié)果如下： 1．對Mg2+濃度、d

2、NTPs、TaqDNA聚合酶等3個(gè)因素進(jìn)行4個(gè)水平的正交優(yōu)化設(shè)計(jì)，建立了早熟禾ISSR的最佳反應(yīng)體系：25μL反應(yīng)體系中1．25UTaq酶，1．5mmol·L-1Mg2+，10×PCRBuffer2．5μL，0．4mmol·L-1dNTP，1μL引物，1μLDNA模板。擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性3min；94℃變性30s，引物退火30S，72℃延伸1min，循環(huán)35次；72℃延伸7min，4℃保存。在此反應(yīng)體系下，可以得到重復(fù)性好、穩(wěn)定且

3、多態(tài)性高的條帶。 2．在31個(gè)供試材料中，6條ISSR引物共擴(kuò)增出111個(gè)條帶，平均每個(gè)引物擴(kuò)增出18．5條，平均多態(tài)性條帶比率為97．79%。 3．利用NTSYS-PC軟件計(jì)算供試材料的Jaccard遺傳相似系數(shù)（GS），31份材料之間的遺傳相似系數(shù)分布在0．4878～0．9512之間。 4．用POPGENE1．31分析軟件早熟禾遺傳多樣性進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果表明：早熟禾的遺傳距離變化范圍為0．1301～0．50