外周血及胸腔積液中腫瘤細(xì)胞的檢測(cè)在非小細(xì)胞肺癌患者中的臨床意義.pdf

1、目的：
　　肺癌的發(fā)病率和死亡率在中國(guó)乃至全世界都居首位。目前對(duì)肺癌患者的診斷主要依靠影像學(xué)及組織病理學(xué)，但仍受到諸多限制。隨著檢測(cè)方法的不斷完善，循環(huán)腫瘤細(xì)胞（circulating tumor cell, CTC）作為一項(xiàng)新的腫瘤標(biāo)志物，其特異性及敏感性都得到了不斷提高。本研究通過(guò)富集純化系統(tǒng)、特異性小分子探針以及熒光定量PCR系統(tǒng)對(duì)CTC進(jìn)行檢測(cè)，評(píng)價(jià)外周血及胸腔積液中腫瘤細(xì)胞計(jì)數(shù)對(duì)非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)患者的臨床應(yīng)用價(jià)

2、值。
　　方法：
　　1.病例及樣本：收集2013年1月～2014年6月無(wú)錫市第二人民醫(yī)院診斷的73例NSCLC患者（其中50例合并胸腔積液）作為研究對(duì)象，同時(shí)收集良性肺部疾病患者35例。
　　2.外周血CTC檢測(cè)：采集上述各研究組靜脈血標(biāo)本對(duì)CTC進(jìn)行檢測(cè)。應(yīng)用CTC富集純化系統(tǒng)裂解樣品中的紅細(xì)胞并通過(guò)免疫磁珠篩選去除白細(xì)胞。然后將富集到的CTC用腫瘤特異性葉酸配體—寡聚核苷酸復(fù)合物標(biāo)記，洗滌去除未結(jié)合的復(fù)合物，并將

3、與CTC結(jié)合的復(fù)合物特異性地洗脫下來(lái)進(jìn)行定量PCR檢測(cè)。
　　3.外周血CTC與臨床特征的關(guān)系：分析73例初診NSCLC患者術(shù)前CTC水平與NSCLC患者年齡、性別及臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。利用電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血清中CEA與CYFRA21-1的水平，并分析外周血CTC與血清CEA， CYFRA21-1水平的相關(guān)性。
　　4. CTC在手術(shù)效果中的評(píng)價(jià)：術(shù)后第9天再次采集NSCLC患者外周血并檢測(cè)CTC的含量，通過(guò)比較手術(shù)前后

4、不同時(shí)期CTC水平的變化，判斷CTC在手術(shù)效果評(píng)價(jià)中的意義。
　　5. CTC對(duì)NSCLC患者的預(yù)后評(píng)估：利用Kaplan-Meier法評(píng)價(jià)術(shù)前不同外周血CTC水平對(duì)NSCLC患者的預(yù)后評(píng)估價(jià)值。
　　6.胸腔積液中腫瘤細(xì)胞水平分析：對(duì)50例NSCLC合并胸腔積液患者胸腔積液中的腫瘤細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)，比較腫瘤細(xì)胞在胸腔積液和外周血之間的差異性表達(dá)。用全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光分析儀檢測(cè)胸腔積液中CEA的水平并分析其與胸腔積液腫瘤細(xì)胞水平的

5、相關(guān)性。比較胸腔積液中腫瘤細(xì)胞檢測(cè)與常規(guī)脫落細(xì)胞學(xué)檢查之間的關(guān)系。
　　結(jié)果：
　　1. NSCLC患者外周血CTC計(jì)數(shù)顯著高于良性肺部疾病對(duì)照組(p＜0.01)。
　　2. CTC水平隨著TNM分期遞進(jìn)而增加(p＜0.01)，隨著腫瘤病理分化程度升高而降低(p＜0.01)，隨著腫瘤大小增加而增加(p＜0.01)，而與患者年齡、性別以及腫瘤組織類型無(wú)明顯關(guān)系(p＞0.05)；NSCLC患者外周血術(shù)前CTC與CEA水平呈

6、正相關(guān)（r=0.543，p＜0.01），與CYFRA21-1水平無(wú)相關(guān)性（r=-0.067, p＞0.05）。
　　3.初診NSCLC患者組術(shù)后第9天的外周血CTC水平顯著低于術(shù)前，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=6.654, p＜0.01)。
　　4. Kaplan-Meier結(jié)果顯示，CTC≥16.5 CU時(shí)與NSCLC死亡率相關(guān)（χ2=51.21， p＜0.01）。
　　5. NSCLC患者胸腔積液中腫瘤細(xì)胞顯著高于外周

7、血中循環(huán)腫瘤細(xì)胞水平，且患者胸腔積液中腫瘤細(xì)胞數(shù)值與外周血中循環(huán)腫瘤細(xì)胞水平相關(guān)系數(shù)為0.882(p＜0.0001)，呈顯著正相關(guān)。胸腔積液中腫瘤細(xì)胞水平和CEA水平呈顯著正相關(guān)（r=0.677，p＜0.01）。胸腔積液脫落細(xì)胞病理學(xué)檢查陽(yáng)性組腫瘤細(xì)胞水平顯著高于陰性組（p＜0.01）。
　　結(jié)論：
　　NSCLC患者外周血中CTC及胸腔積液中腫瘤細(xì)胞表達(dá)明顯升高，并且與患者腫瘤發(fā)展、轉(zhuǎn)移及不良預(yù)后密切相關(guān)，是NSCLC治療