ILT3在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及臨床意義.pdf

1、肺癌是目前我國常見且預(yù)后較差的惡性腫瘤,其中非小細(xì)胞肺癌占80％。目前非小細(xì)胞肺癌的治療仍以綜合治療為主,雖然手術(shù)和放療、化療均取得了一定進(jìn)展,但是由于其較高的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率和局部腫瘤生長控制較差,生存率并沒有得到明顯改善。近年來,隨著分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)和免疫學(xué)的發(fā)展,生物治療成為肺癌治療的第四模式。
　　 T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫在人體抗腫瘤免疫機(jī)制中占主要地位。但腫瘤細(xì)胞可以通過多種機(jī)制逃避免疫系統(tǒng)監(jiān)視和T細(xì)胞攻擊,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞

2、的增殖分化。其中免疫負(fù)性調(diào)節(jié)因子能抑制腫瘤特異性APC激活,促進(jìn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞產(chǎn)生,損傷機(jī)體抗腫瘤免疫應(yīng)答。近期研究發(fā)現(xiàn),ILT3在同種異體移植、超敏反應(yīng)、自身免疫性疾病中通過耐受抗原提呈細(xì)胞發(fā)揮免疫抑制作用。但I(xiàn)LT3在實體腫瘤中的研究尚少見。本文通過研究ILT3在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá),初步探討ILT3表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌發(fā)生的關(guān)系,為進(jìn)一步研究ILT3在腫瘤發(fā)生、腫瘤免疫逃逸中的作用提供參考。
　　 目的:
　　 以人非

3、小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株A549,H1975,H460,A427及57例非小細(xì)胞肺癌腫瘤組織為研究對象,分別從mRNA及蛋白水平檢測ILT3的表達(dá)情況,并分析非小細(xì)胞肺癌組織中ILT3的表達(dá)與各臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系,尤其是與腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞(TILs)之間的關(guān)系。
　　 方法:
　　 (1)應(yīng)用RT-PCR檢測ILT3在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株A549,H1975,H460,A427 mRNA水平的表達(dá)情況。
　　 (2)應(yīng)

4、用流式細(xì)胞術(shù)和免疫細(xì)胞化學(xué)分析ILT3在以上細(xì)胞株蛋白水平的表達(dá)情況。
　　 (3)應(yīng)用免疫組化檢測ILT3在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)情況,并分析ILT3的表達(dá)與性別、年齡、腫瘤大小、病理類型、分化程度、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TILs等臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。實驗數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析,P＜0.05時認(rèn)為差異有顯著性。
　　 結(jié)果:
　　 (1)NSCLC細(xì)胞株A549,H1975,H460,A42

5、7中ILT3 mRNA的表達(dá):RT-PCR結(jié)果顯示,以上4個細(xì)胞株均有ILT3 mRNA表達(dá)。ILT3上下游引物分別位于第3、4外顯子上,擴(kuò)增產(chǎn)物跨3、4外顯子,片段大小為393bp。
　　 (2)流式細(xì)胞術(shù)分析結(jié)果顯示,ILT3蛋白在以上細(xì)胞株中都有較強(qiáng)的表達(dá),陽性率分別為31.31％,22.3296,47.07％,41.59％。其陰性對照陽性率分別為0.89％,0.57％,0.94％,0.39％。蛋白水平的表達(dá)陽性率與mRN

6、A半定量結(jié)果有相同趨勢。細(xì)胞爬片免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果與流式細(xì)胞術(shù)分析結(jié)果一致,且證實ILT3不僅表達(dá)于細(xì)胞膜,細(xì)胞漿中也大量存在。
　　 (3)ILT3在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá):
　　 ①57例非小細(xì)胞肺癌組織中ILT3陽性表達(dá)率為35.1％(20/57)。ILT3在組織中呈彌漫性表達(dá),細(xì)胞膜及胞漿均可見陽性顆粒。ILT3陽性表達(dá)也見于腫瘤間質(zhì)浸潤的細(xì)胞。但腫瘤周圍正常肺組織中未見ILT3表達(dá),肺良性病變22例未見ILT3

7、陽性表達(dá)。
　　 ②ILT3的表達(dá)與性別、年齡、腫瘤大小、病理類型、分化程度、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理參數(shù)之間均無相關(guān)性。
　　 ③ILT3表達(dá)與TILs的關(guān)系:ILT3陽性標(biāo)本中CD45+T數(shù)量為23.65±6.218,明顯低于ILT3陰性標(biāo)本中51.54±11.864,P＜0.05,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。同時,ILT3陽性標(biāo)本中浸潤淋巴細(xì)胞周圍未出現(xiàn)腫瘤細(xì)胞壞死或排異的表現(xiàn),提示這些T細(xì)胞是失能的。
　　

8、 結(jié)論:
　　 非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株及組織標(biāo)本中均有ILT3的表達(dá),組織中ILT3的表達(dá)與患者性別、年齡、腫瘤大小、病理類型、分化程度、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等各臨床病理參數(shù)之間無關(guān),但與浸潤的CD45+T細(xì)胞數(shù)量呈負(fù)相關(guān)。同時,ILT3陽性標(biāo)本中浸潤的淋巴細(xì)胞周圍未出現(xiàn)腫瘤細(xì)胞壞死或排異的表現(xiàn),提示這些T細(xì)胞是失能的。因此,ILT3能抑制腫瘤間質(zhì)中T細(xì)胞的浸潤并使之失能,從而介導(dǎo)NSCLC的腫瘤免疫逃逸。清除或封閉腫瘤細(xì)胞ILT3