粟酒裂殖酵母Trz1p核定位序列的進(jìn)一步研究.pdf

1、tRNase Z是一種核酸內(nèi)切酶,能去除非編碼CCA的tRNA前體3’末端多余核苷酸序列,促進(jìn) tRNA3’末端加工成熟。tRNase Z屬于金屬-β-內(nèi)酰胺酶家族,在生物體中tRNase Z有短型(tRNase ZS)和長(zhǎng)型(tRNase ZL)兩種形式,不同的生物體中有不同數(shù)量不同類(lèi)型的 tRNase Z。本課題主要涉及的研究是粟酒裂殖酵母(Schizosaccharo—myces pombe,S.pombe)核酸內(nèi)切酶tRNase

2、 Z基因的相關(guān)功能研究。在裂殖酵母(S.pombe)中編碼有兩個(gè)tRNase ZL基因:分別是sptrzl+(SPAC1D4.10)和 sptrz2+(SPBC3D6.03c)。本課題重點(diǎn)對(duì)裂殖酵母sptrzl+的核定位序列進(jìn)行進(jìn)一步分析:利用EGFP作為示蹤蛋白,采用逐漸截短基因的方法,構(gòu)建EGFP與不同截短蛋白的融合蛋白,觀察這些融合蛋白的熒光信號(hào)分布情況,分析確定各個(gè)融合蛋白的核定位序列的細(xì)胞定位。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)含有208KKRK211

3、的融合蛋白明顯的分布在細(xì)胞核中,不含這四種氨基酸的融合蛋白的熒光信號(hào)散布在細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中,說(shuō)明 trzl+基因的208KKRK211氨基酸序列在SpTrzlp入核中發(fā)揮著重要的作用。這充分證實(shí)裂殖酵母sptrzl+基因的細(xì)胞定位是在細(xì)胞核,其功能的發(fā)揮主要是在細(xì)胞核中進(jìn)行。同時(shí),采用合成寡核苷酸的方法結(jié)合截短片段的分析,進(jìn)一步確定裂殖酵母sptrzl+基因中KKRK只有一個(gè)核定位序列,其序列分布存在該基因的 N端,并且可以初步確定FK

4、KRKHENINRG是其核定位序列。
　　 線粒體的tRNA加工方式與核定位的tRNA加工方式存在差異,裂殖酵母sptrz2+基因定位在線粒體,本課題期望通過(guò)研究sptrz2+基因的功能,對(duì)線粒體的tRNA3'端加工方式有一定的突破。課題設(shè)計(jì)利用sptrz2+基因溫度敏感型菌株,比較溫度敏感型菌株與野生型菌株sptrz2+基因tRNA3’端加工方式的差異,從另一個(gè)角度研究分析裂殖酵母線粒體tRNA加工方式。
　　 裂殖酵