粟酒裂殖酵母線粒體蛋白Mpa1的相關(guān)功能研究.pdf

1、線粒體可以進(jìn)行氧化磷酸化和三磷酸腺苷(ATP)的合成，被稱(chēng)為細(xì)胞內(nèi)的發(fā)動(dòng)機(jī)，是真核生物中一種十分重要的細(xì)胞器。線粒體既是機(jī)體能量代謝的中心，又參與了多種細(xì)胞的病理過(guò)程。線粒體中的蛋白表達(dá)異常是引起線粒體功能產(chǎn)生障礙的重要因素。而裂殖酵母在進(jìn)化上與人類(lèi)更為接近，又加上它增殖周期短、培養(yǎng)和操作較簡(jiǎn)單，所以是對(duì)線粒體功能進(jìn)行研究時(shí)常用的一種模式生物。線粒體里有很多蛋白，它們對(duì)線粒體功能的發(fā)揮有著非常重要的影響。Mpa1是我們實(shí)驗(yàn)室近期發(fā)現(xiàn)的一

2、個(gè)線粒體蛋白，它是被Ppr10通過(guò)串聯(lián)親和純化免疫沉淀反應(yīng)共沉淀下來(lái)的一個(gè)蛋白，并且已經(jīng)被我們實(shí)驗(yàn)室證實(shí)與Ppr10存在相互作用。本文將進(jìn)一步探究線粒體蛋白Mpa1的功能。
　　我們實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)，Mpa1的缺失會(huì)影響Ppr10蛋白的穩(wěn)定存在。在本文研究中，我們首先通過(guò)構(gòu)建抗性標(biāo)簽質(zhì)粒，構(gòu)建了△lon1、△mpa1和△mpa1△lon1突變體。通過(guò)對(duì)△mpa1△lon1突變體中Ppr10蛋白水平的檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)敲除lon1后，

3、Ppr10蛋白能夠穩(wěn)定存在，這說(shuō)明Ppr10蛋白的減少就是被Lon1降解的。然后通過(guò)點(diǎn)圈實(shí)驗(yàn)檢測(cè)線粒體的呼吸鏈功能，結(jié)果表明lon1基因的敲除雖然使得Ppr10蛋白不再被降解，但是線粒體的功能并沒(méi)有得到修復(fù)。接著通過(guò)蛋白質(zhì)免疫印記分析實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了線粒體編碼的蛋白水平，結(jié)果表明lon1基因的敲除雖然使得Ppr10蛋白不再被降解，卻不能修復(fù)降低了的線粒體編碼的蛋白水平。這說(shuō)明，△mpa1突變體所表現(xiàn)出來(lái)的線粒體功能障礙，不是由于Ppr10蛋白