uPA和uPAR基因表達調(diào)控及與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的關系.pdf

1、上海醫(yī)科大學博士學位論文uPA和uPAR基因表達調(diào)控及與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的關系姓名：何誠申請學位級別：博士專業(yè)：分子生物學指導教師：朱運松2000.5.1禱t 學位論盅：：中文摘婺這調(diào)控的不同方式，并探討了腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因n m 2 3 牛f 1 抑制腫瘤轉(zhuǎn)移和下調(diào)u P A 和u P A R 表達之閽的關系。∥1 人肺巨細胞癌高低轉(zhuǎn)移株中纖溶酶原激活系統(tǒng)組分的差異表達分析人肺巨細胞癌高( 9 5 D ) 和低轉(zhuǎn)移株( 9 5 C ) 由北

2、京解放軍總醫(yī)院箱理辯1 9 8 9 年建椿，它們皋自麓一母細胞系，遺傳背景相近，但侵襲轉(zhuǎn)移潛能不同，作為研究基因表達和腫瘤轉(zhuǎn)移的細胞模型，具有較好穩(wěn)可兜掛。1 ．1 9 5 D 和9 5 C 細胞侵襲轉(zhuǎn)移潛能的重新鑒定體外侵襲能力實驗采薅改良秘B o y d e n —t r a n s w e l l ，j 、室方法，鬣微鏡下( 4 0 0 ×) 觀察侵襲移動到多孔濾膜外側(cè)面上的細胞，隨機計數(shù){ 0 。{ 2 令撬孥內(nèi)的細胞

3、數(shù)，取平均擒。結(jié)聚顯示，高轉(zhuǎn)移妁9 5 D 細胞穿過人工重建基底膜的細胞數(shù)明顯多于低轉(zhuǎn)移的9 5 C 細胞數(shù)i 7 3 ．7 5 ±7 + 7 5V S5 6 。3 3 ±6 ．5 5 個細胞／4 0 0X ) ，t 檢驗顯示其萎異有爨著性意義( p < 0 ．0 0 1 ) 。俸內(nèi)轉(zhuǎn)移潛繇分櫥漫示皮下接特9 5 D 細胞秘6 只裸鼠皮下瘤均有生長( 6 ／6 ) ，均發(fā)生肺轉(zhuǎn)移( 6 ／6 ) ，未見肝、脾、

4、腎轉(zhuǎn)移；皮下接毋9 5 C 紐跑戇6 只裸鼠有4 只霓皮下瘤生長( 4 1 6 ) ，肺、肝、辟、腎均未見轉(zhuǎn)移灶( 0 ，6 o 9 5 D 和9 5 C 細胞的皮下腫瘤生長率熊本一致。以上結(jié)果說明9 5 D 和9 5 C 細胞仍保持其明照不同的轉(zhuǎn)移潛能。l 。2 R T ．P C R 分榜9 5 D 務9 5 C 緞憨孛鱔溶酶艨激活系統(tǒng)各組分的表達半定蚤R T —P C R 除分析u P A 和u P A R 的表達外，同時還分析了鯉

5、織型紓?cè)苊冈せ顒x( t i s s u e - t y p ep l a s m i n o g e na c t i v a t o r ，1 ．P A )及I 型和I | 型纖溶酶原激活物抑制劑( P A l ．1 、P A l ．2 ) 的表述。R T ．P C R 擴增的霉的片段與對照1 3 - a c t i n 片段絞凝黢電泳分離后進行灰度掃描，并取其比值進行相對定量分析。結(jié)果顯示u P A 和u P A R 在9 5 D

6、細胞中的表達量分別是9 5 C 細胞中表達量的l 。8 4 爭4 ．3 3 倍；赫P A l 一2和t ．P A 在9 5 D 中的表達量分別是9 5 C 細胞中表達量的O ．4 和0 ．5 4倍。P A l ．1 在9 5 D 務9 5 C 中的表達都較高。1 ．3 細胞免疫組化分析9 5 D 和9 5 C 細胞中纖溶酶原激活系統(tǒng)備組分的表述用A B C 試剎盒分析t P A 、u P A 、u P A R 、P A l ．’和P A