TFPI-2基因表達(dá)與肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移的研究.pdf

1、目的：檢測(cè)肝癌組織和癌旁正常肝組織中，組織因子途徑抑制物2（TFPI-2）基因表達(dá)的差異；轉(zhuǎn)染TFPI-2基因真核表達(dá)載體（pcDNA3.1-TFPI-2）入人肝癌細(xì)胞株HepG2，篩選其穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株；探討TFPI-2在肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移中的作用及機(jī)制。 方法：第一階段：以TFPI-2 cDNA為探針，應(yīng)用原位雜交技術(shù)檢測(cè)肝癌組織和癌旁正常肝組織中TFPI-2 mRNA表達(dá)的差異；應(yīng)用免疫組化和Western Blot印

2、跡方法，檢測(cè)兩種組織中TFPI-2蛋白表達(dá)的差異。第二階段：利用脂質(zhì)體將pcDNA3.1-TFPI-2真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)染人肝癌細(xì)胞株HepG2，G418篩選穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞系，RT-PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后TFPI-2 mRNA的表達(dá)，Western Blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后培養(yǎng)液中TFPI-2蛋白的表達(dá)；第三階段：應(yīng)用MTT法測(cè)定轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-TFPI-2對(duì)HepG2細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的影響，并用流式細(xì)胞儀分析轉(zhuǎn)染前后HepG2細(xì)胞增殖周期的改變

3、；利用Transwell小室法檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后肝癌細(xì)胞穿膜細(xì)胞數(shù)，評(píng)價(jià)肝癌細(xì)胞體外侵襲遷徙能力的變化。 結(jié)果：與正常肝組織相比，肝癌組織中TFPI-2 mRNA的表達(dá)顯著降低，TFPI-2陽性標(biāo)記指數(shù)分別為30.66±2.47和88.23±1.43（P<0.05）；免疫組化檢測(cè)肝癌組織中TFPI-2蛋白的表達(dá)顯著降低，TFPI-2陽性標(biāo)記指數(shù)分別為22.54±1.22和46.60±1.80（P<0.05）；Quantity One軟

4、件分析Western blot TFPI-2蛋白條帶灰度值，與β-actin比值分別為1.14±0.13和0.89±0.15，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。成功轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-TFPI-2的HepG2細(xì)胞，證實(shí)有TFPI-2 mRNA和蛋白的表達(dá)；與未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞相比，轉(zhuǎn)染后的HepG2細(xì)胞生長(zhǎng)明顯受到抑制，細(xì)胞增殖周期阻滯于G0/G1期；轉(zhuǎn)染TFPI-2的HepG2細(xì)胞體外侵襲能力顯著下降（穿膜細(xì)胞數(shù)為45.2±5.6 vs8