低氧狀態(tài)下乳腺癌細(xì)胞uPA、uPAR的表達(dá).pdf

1、目的：研究體外低氧對(duì)乳腺癌細(xì)胞和體內(nèi)塞來昔布對(duì)乳腺癌組織低氧區(qū)uPA、uPAR和HIF-1α表達(dá)的影響及機(jī)制；以及研究塞來昔布對(duì)乳腺癌組織低氧區(qū)的細(xì)胞凋亡和血管生成的影響，探討塞來昔布治療低氧腫瘤的可行性。 方法：采用CoCl<,2>模擬體外低氧模型，人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞用0、50、100、150、200μmol/L CoCl<,2>分別處理16h，用于觀察量效關(guān)系；用100μmol/L CoCl<,2>分別處理0、

2、8、16、24、32h，用于觀察時(shí)效關(guān)系。采用RT-PCR檢測(cè)uPA mRNA和uPAR mRNA的表達(dá)，免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)uPA、uPAR和HIF-1α的蛋白表達(dá)。建立人乳腺癌裸鼠皮下移植瘤模型，給予選擇性COX-2抑制劑塞來昔布(10mg/kg/d)灌胃，共30天，采用免疫組化法檢測(cè)移植瘤低氧區(qū)uPA、uPAR和HIF-1α蛋白以及MVD的表達(dá)。采用TUNEL法檢測(cè)移植瘤低氧區(qū)細(xì)胞的凋亡指數(shù)(AI)。 結(jié)果：在量效組中，各處

3、理組(50、100、150、200μmol/L COCl<,2>，16h)的uPA mRNA和uPAR mRNA的表達(dá)高于對(duì)照組(0μmol/LCoCl<,2>，16h)(P<0.05)。在時(shí)效組中，各處理組(100μmol/L CoCl<,2>，8、16、24、32h)的uPA mRNA和uPAR mRNA的表達(dá)高于對(duì)照組(100μmol/LCoCl<,2>，0h)(P<0.05)。在MB-231細(xì)胞中uPA mRNA和uPAR mR

4、NA的表達(dá)隨CoCl<,2> 濃度的增加或處理的時(shí)間延長(zhǎng)逐漸增強(qiáng)(P<0.05)，在量效組中100μmol/L時(shí)高表達(dá)，在時(shí)效組中16h時(shí)高表達(dá)，然后兩組的表達(dá)都逐漸減弱(P<0.05)。uPA、uPAR和HIF-1α蛋白的表達(dá)也具有類似效應(yīng)。在體內(nèi)，塞來昔布組的uPA、uPAR和HIF-1α蛋白的表達(dá)分別為0.207±0.049,0.203±0.048和0.181±0.058；對(duì)照組的uPA、uPAR和HIF-1α蛋白表達(dá)分別為0.2

5、98±0.071、0.289±0.068和0.281±0.075。塞來昔布能夠抑制移植瘤低氧區(qū)uPA、uPAR和HIF-1α蛋白的表達(dá)(P<0.05)。塞來昔布組的MVD和AI分別為19.80±2.59和5.616±0.892，對(duì)照組的MVD和AI分別為26.80±3.42和3.089±0.609，塞來昔布能夠促進(jìn)移植瘤低氧區(qū)MB-231細(xì)胞的凋亡和抑制其血管生成(P<0.01)。 結(jié)論： ①CoCl<,2>模擬體外低氧