MMP-7基因及蛋白表達(dá)在胃癌侵襲和轉(zhuǎn)移中的作用.pdf

1、中國醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文MMP7基因及蛋白表達(dá)在胃癌侵襲和轉(zhuǎn)移中的作用姓名：馮眾一申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：徐惠綿2003.4.1升。若有自然腹水則直接抽取。取腹水時(shí)盡可能避免出血，防止腹水中混入血液成分。抽取的腹水或沖洗液分成兩等分在低溫離心機(jī)中2000轉(zhuǎn)／分，離心15分鐘。一部分上清液置于一70。C冰箱中凍存，沉渣涂片HE染色查瘤細(xì)胞；另一部分取沉渣立即加入1毫升阿肋l液進(jìn)行總RNA提取及反轉(zhuǎn)錄，將eDNA置700C冰

2、箱中凍存，以備PCR擴(kuò)增。lit—PCR擴(kuò)增：1)總RNA提??；2)逆轉(zhuǎn)錄合成MMP一7eDNA；3)PCR擴(kuò)增MMP一7；4)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測(cè)與半定量。其中Trizol一步法總RNA提取。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳銀染。自動(dòng)圖象分析系統(tǒng)分別對(duì)目的基因MMP一7及內(nèi)對(duì)照GAPDH的擴(kuò)增產(chǎn)物條帶進(jìn)行分析，通過MMP一7指數(shù)對(duì)MMP一7mRNA進(jìn)行半定量。MMP一7指數(shù)=MMP一7值／GAPDH值，MMP7指數(shù)與其mRNA含量

3、呈正變關(guān)系。免疫組化染色：采用S—P法。微波修復(fù)處理。PBS代替一抗作空白對(duì)照，已知表達(dá)MMP一7乳腺癌切片作陽性對(duì)照。用正常兔血清代替一抗作陰性對(duì)照，參照S—P試劑盒說明書進(jìn)行免疫組化染色。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：最后應(yīng)用x2檢驗(yàn)對(duì)免疫組化結(jié)果及t檢驗(yàn)對(duì)RT—PCR結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果胃癌組織MMP一7基因及蛋白表達(dá)：MMP一7蛋白幾乎均為胃癌細(xì)胞胞漿或胞膜表達(dá)，陽性率為166％，基質(zhì)不表達(dá)，偶有正常胃粘膜上皮細(xì)胞極弱表達(dá)。浸潤(rùn)深度透漿膜者M(jìn)