MMP-7基因及蛋白表達在胃癌侵襲和轉移中的作用.pdf

1、中國醫(yī)科大學博士學位論文MMP7基因及蛋白表達在胃癌侵襲和轉移中的作用姓名：馮眾一申請學位級別：博士專業(yè)：腫瘤學指導教師：徐惠綿2003.4.1升。若有自然腹水則直接抽取。取腹水時盡可能避免出血，防止腹水中混入血液成分。抽取的腹水或沖洗液分成兩等分在低溫離心機中2000轉／分，離心15分鐘。一部分上清液置于一70。C冰箱中凍存，沉渣涂片HE染色查瘤細胞；另一部分取沉渣立即加入1毫升阿肋l液進行總RNA提取及反轉錄，將eDNA置700C冰

2、箱中凍存，以備PCR擴增。lit—PCR擴增：1)總RNA提取；2)逆轉錄合成MMP一7eDNA；3)PCR擴增MMP一7；4)PCR擴增產物的檢測與半定量。其中Trizol一步法總RNA提取。PCR擴增產物進行聚丙烯酰胺凝膠電泳銀染。自動圖象分析系統(tǒng)分別對目的基因MMP一7及內對照GAPDH的擴增產物條帶進行分析，通過MMP一7指數(shù)對MMP一7mRNA進行半定量。MMP一7指數(shù)=MMP一7值／GAPDH值，MMP7指數(shù)與其mRNA含量

3、呈正變關系。免疫組化染色：采用S—P法。微波修復處理。PBS代替一抗作空白對照，已知表達MMP一7乳腺癌切片作陽性對照。用正常兔血清代替一抗作陰性對照，參照S—P試劑盒說明書進行免疫組化染色。統(tǒng)計學分析：最后應用x2檢驗對免疫組化結果及t檢驗對RT—PCR結果進行統(tǒng)計學分析。結果胃癌組織MMP一7基因及蛋白表達：MMP一7蛋白幾乎均為胃癌細胞胞漿或胞膜表達，陽性率為166％，基質不表達，偶有正常胃粘膜上皮細胞極弱表達。浸潤深度透漿膜者M