IL-22在幽門螺桿菌感染中的表達(dá)特性及作用機(jī)制研究.pdf

1、幽門螺桿菌(Helicobacter pylori，H. Pylori)是一種螺旋狀、微需氧革蘭陰性桿菌，主要定植于人胃粘膜，已造成全世界50％以上人口感染。H. Pylori 感染是慢性胃炎、消化性潰瘍及胃粘膜相關(guān)淋巴組織淋巴瘤(MALT)等疾病的重要致病因子，與胃癌的發(fā)生密切相關(guān)，已被WHO 列為Ⅰ類致癌因子。H. Pylori 感染能夠引起機(jī)體較強(qiáng)的天然和獲得性免疫應(yīng)答，但自然感染H. Pylori后的免疫反應(yīng)并不能清除細(xì)菌，反而

2、由于細(xì)菌的持續(xù)感染導(dǎo)致胃粘膜免疫病理損害。到目前為止，H. Pylori 慢性持續(xù)性感染及相關(guān)免疫機(jī)制并不清楚。
　　 細(xì)胞因子作為細(xì)胞間的信使分子，通過和靶細(xì)胞上的受體相結(jié)合，產(chǎn)生特定的生物學(xué)效應(yīng)。H. Pylori的慢性感染是細(xì)菌與宿主相互作用的結(jié)果，在此過程中有許多細(xì)胞因子參與并發(fā)揮了不同的功能?，F(xiàn)已證明：CD4+T細(xì)胞(Th細(xì)胞)在H. Pylori 感染過程中發(fā)揮重要作用。因此，目前關(guān)于H. Pylori 感染激發(fā)的細(xì)

3、胞因子的研究多集中于Th細(xì)胞相關(guān)的細(xì)胞因子上。以往研究認(rèn)為，IFN-γ主要參與宿主的炎癥反應(yīng)，并導(dǎo)致胃粘膜損傷甚至潰瘍；而IL-4在一定程度上能夠緩解胃炎，并降低H. Pylori的定植。
　　 近年來研究發(fā)現(xiàn)一些新型Th細(xì)胞亞群如Th17，Th22，Th9等，這些細(xì)胞亞群在多種慢性炎癥性疾病中發(fā)揮著重要作用。探明新型細(xì)胞亞群相關(guān)重要細(xì)胞因子的功能，將有助于增加以慢性炎癥為機(jī)制相關(guān)疾病的理解，為慢性炎癥疾病的免疫防治提供新的思路

4、。IL-22是Th17及Th22細(xì)胞產(chǎn)生的重要效應(yīng)因子，目前報道顯示，IL-22通過誘導(dǎo)角質(zhì)化細(xì)胞產(chǎn)生促炎癥因子和趨化因子，介導(dǎo)炎癥反應(yīng)，在皮膚炎癥性疾病中參與致病過程，而在肺炎克雷伯菌及嚙齒枸椽酸桿菌感染模型中，IL-22通過調(diào)控局部炎癥反應(yīng)及刺激上皮細(xì)胞分泌抗菌肽等參與宿主防御反應(yīng)。提示IL-22 依據(jù)其所處的炎癥微環(huán)境不同，具有發(fā)揮促炎致病或防御保護(hù)雙重作用的特性。在我們的預(yù)實驗中首次發(fā)現(xiàn)：H. Pylori 感染患者胃組織中IL

5、-22呈異常高表達(dá)。那么在H. Pylori 引起的以慢性炎癥為特征的感染性疾病中，IL-22 發(fā)揮什么樣的功能呢？目前尚未見報道。
　　 【研究目的】
　　 1.本課題擬以Th細(xì)胞重要效應(yīng)因子IL-22作為主要研究對象，研究在H. Pylori感染中的表達(dá)特性；2. 初步探明IL-22在H. Pylori 感染中的作用及機(jī)制。
　　 【研究方法】
　　 1.IL-22在H. Pylori 感染中的表達(dá)特

6、性研究收集消化內(nèi)科胃炎患者胃粘膜組織，提取組織RNA，采用定量PCR 檢測細(xì)胞因子mRNA水平情況及H. Pylori 定植拷貝數(shù)；提取組織蛋白，ELISA 檢測IL-22蛋白表達(dá)；
　　 病理切片H&E 染色檢測胃組織炎癥。部分患者采用耐信、阿莫西林克拉維酸鉀和痢特靈三聯(lián)療法治療，同時收集治療后胃粘膜標(biāo)本，定量PCR 檢測IL-22表達(dá)，病理切片H&E 染色檢測胃組織炎癥，分析IL-22表達(dá)與H. Pylori 定植及胃組織炎

7、癥的相關(guān)性。
　　 2.IL-22+T細(xì)胞在H. Pylori 感染中的應(yīng)答研究首先，建立H. Pylori 26695 感染細(xì)胞模型，定量PCR在細(xì)胞感染模型中檢測分泌IL-22的細(xì)胞類型，并采用雙重免疫熒光染色及流式在胃組織中進(jìn)一步驗證。隨后，采用流式檢測分泌IL-22的T細(xì)胞亞群在H. Pylori 感染患者胃組織中的應(yīng)答情況。最后，采用定量PCR在CagA、UreB基因敲除株及出發(fā)菌株H. Pylori 26695 感染

8、細(xì)胞模型及胃粘膜標(biāo)本中鑒定誘導(dǎo)IL-22表達(dá)的H. Pylori 毒力因子。
　　 3.IL-22在H. Pylori 感染中的作用機(jī)制研究采用流式檢測不同刺激因素下AGS細(xì)胞表面IL-22R1表達(dá)情況，定量PCR及組織免疫熒光染色檢測胃組織中IL-22R1表達(dá)，明確H. Pylori 感染胃粘膜組織后IL-22R1的表達(dá)情況；IL-22 刺激胃上皮細(xì)胞24h后，收集細(xì)胞，定量PCR 檢測促炎癥因子及基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)表達(dá)

9、，檢測IL-22對胃上皮細(xì)胞的作用；采用定量PCR 檢測胃組織中促炎癥因子及MMPs表達(dá)并分析與IL-22表達(dá)的相關(guān)性，初步探討IL-22在H. Pylori 感染中的功能；體外采用Transwell細(xì)胞趨化實驗檢測IL-22對淋巴細(xì)胞的趨化作用，探討IL-22 促炎作用的機(jī)制。
　　 【結(jié)論】
　　 1.CagA＋H. Pylori 感染后能夠誘導(dǎo)IL-22 轉(zhuǎn)錄水平與蛋白表達(dá)上調(diào)，且IL-22表達(dá)與H. Pylori

10、 定植拷貝數(shù)及粘膜炎癥程度呈顯著相關(guān)。
　　 2.胃組織中分泌IL-22的細(xì)胞主要為上皮細(xì)胞和記憶型T淋巴細(xì)胞，并且分泌IL-22的T淋巴細(xì)胞亞群在H. Pylori 感染患者的胃粘膜中應(yīng)答增強(qiáng)；鑒定H. Pylori 毒力因子CagA是調(diào)控IL-22表達(dá)的分子。
　　 3.在H. Pylori 感染過程中，IL-22通過調(diào)控多種促炎癥因子的表達(dá)，誘導(dǎo)炎癥細(xì)胞浸潤等參與炎癥反應(yīng)過程。
　　 【意義】