小鵝瘟腸道損傷機(jī)制的研究與VP3基因重組腺病毒的構(gòu)建.pdf

1、小鵝瘟是一種由鵝細(xì)小病毒引起的急性或亞急性敗血性傳染病。典型的小鵝瘟表現(xiàn)為心包積水、肝炎和心肌炎，其最典型病變是在腸道發(fā)生纖維素性敗血性腸炎。目前，免疫接種仍然是防制小鵝瘟的重要措施。國內(nèi)外常用的小鵝瘟疫苗為弱毒疫苗，盡管弱毒疫苗對小鵝瘟的防控起到了關(guān)鍵性作用，但這類疫苗仍存在許多不足。本試驗(yàn)為探討小鵝瘟病毒對雛鵝腸道損傷的機(jī)制，應(yīng)用實(shí)時熒光定量PCR法檢測了雛鵝腸組織中COX-2、iNOS、NF-κB、IL-1β和TNF-α的mRNA

2、表達(dá)量。同時通過同源重組法將小鵝瘟病毒VP3基岡與復(fù)制缺陷型人5型腺病毒載體重組，構(gòu)建小鵝瘟新型活載體疫苗。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:
　　 1.小鵝瘟感染后，雛鵝腸組織中COX-2、iNOS、NF-κB、IL-1β和TNF-αmRNA表達(dá)量均顯著升高，特別是在回腸和空腸中上升的幅度最明顯。表明GPV感染能上調(diào)炎癥因子的表達(dá)，引起鵝腸道炎性損傷。
　　 2.成功構(gòu)建重組穿梭載體pShuttle-CMV-VP3，同源重組獲得重組腺病毒

3、質(zhì)粒pAD-VP3，在HEK293細(xì)胞中成功包裝腺病毒載體疫苗rAD-VP3;通過PCR與Weston-blot鑒定了重組病毒在HEK293細(xì)胞中表達(dá)。
　　 3.將重組腺病毒疫苗在小鼠體內(nèi)進(jìn)行免疫效力試驗(yàn)。用間接ELISA法測定小鼠血清抗體效價，一免后抗體效價可達(dá)1∶51200，證明重組病毒可以誘發(fā)小鼠產(chǎn)生特異性免疫。
　　 綜上所述，本研究表明炎癥因子COX-2、iNOS、NF-κB、IL-1β和TNF-α參與了小鵝