鵝細小病毒延邊株VP3基因真核表達質(zhì)粒構(gòu)建及在Vero細胞中的表達.pdf

1、鵝細小病毒病是危害養(yǎng)鵝業(yè)發(fā)展的最重要的傳染病之一，該病主要感染10日齡以內(nèi)的雛鵝或雛潘鴨，雛鵝或雛潘鴨感染該病后，多呈現(xiàn)急性或者亞急性敗血性傳染病，由于鵝細小病毒病傳播迅速，病死率高，病程較短，所以一旦流行該病，給養(yǎng)殖者帶來的巨大經(jīng)濟損失，由于該病有上述特點，所以有很多學(xué)者對鵝細小病毒病進行研究和關(guān)注。該病的預(yù)防方法，都存在著保護力低、成本高、特異性不強等一種或多種缺點，目前尚無有效的藥物或疫苗控制該病的流行與發(fā)展。鵝細小病毒VP3基因

2、是該病毒的主要衣殼蛋白和重要保護性抗原，具有高度的保守性，能誘導(dǎo)機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答反應(yīng)，刺激機體產(chǎn)生中和性抗體。基因工程疫苗生產(chǎn)成本低，使用方便，接種后可長期刺激動物機體產(chǎn)生抗體，保護時間長，易于在臨床上應(yīng)用推廣。
　　本試驗根據(jù)發(fā)表的鵝細小病毒VP3基因序列，利用引物設(shè)計軟件根據(jù)已發(fā)表的基因設(shè)計了1對引物，該引物具有一定的特異性，應(yīng)用PCR技術(shù)擴增鵝細小病毒VP3基因，將鑒定正確的VP3基因克隆到PMD18—T Simple載體上

3、，進行PCR、雙酶切鑒定和測序鑒定，將鑒定正確的PMD18—VP3基因，連接到真核表達載體PVAXI上，并進行PCR、雙酶切鑒定和測序鑒定，構(gòu)建了真核表達載體PVAXI-VP3基因，將PVAX—VP3基因，轉(zhuǎn)染到Vero細胞中，觀察是否能在Vero細胞中，觀察是否能在Vero細胞中進行瞬間表達。
　　結(jié)果表明，PCR擴增VP3基因片段大小為980bp，雙酶切鑒定，目的基因片段大小為980bp，測序結(jié)果與鵝細小病毒 B株序列進行同源