艾葉揮發(fā)油納米結構脂質載體的制備及其抗乙肝病毒活性的研究.pdf

1、艾葉為菊科多年生草本植物艾（Artemisia argyi Lévl.et Vant.)的干燥葉，是臨床常用傳統(tǒng)中藥。艾葉揮發(fā)油是其主要有效成分群，具抗菌抗病毒、平喘鎮(zhèn)咳祛痰、抗過敏、免疫、護肝利膽等作用[1-9]。本課題組前期研究，首次發(fā)現艾葉揮發(fā)油具有抗乙肝病毒活性[10]。為研究艾葉揮發(fā)油抗乙肝病毒(HBV)新藥，又鑒于艾葉揮發(fā)油水難溶、易揮發(fā)、不穩(wěn)定，影響藥效，本文對艾葉揮發(fā)油納米結構脂質載體(Nanostructured li

2、pid carrier system,NLC)進行了研究，包括：艾葉揮發(fā)油NLC的制備、質量評價、藥代動力學、組織分布和藥效學。此研究未見報道。
　　1.艾葉揮發(fā)油NLC的制備及質量評價
　　采用加熱熔融-超聲分散法制備艾葉揮發(fā)油 NLC，通過單因素實驗和正交試驗優(yōu)化制備工藝及處方。最佳制備工藝為：初乳攪拌10min，超聲時間15min，超聲振幅100％。最佳處方為：波洛沙姆1880.45g，蛋黃卵磷脂0.15g，單硬脂酸甘

3、油酯0.1g，辛酸/癸酸甘油三酯0.1g，艾葉揮發(fā)油0.1g，蒸餾水加至20mL。
　　通過氣相色譜法建立了艾葉揮發(fā)油NLC的多成分定量測定方法。方法精密度高，重現性好，桉油精、樟腦、龍腦加樣回收率均在95%?105%之間。測得的桉油精、樟腦、龍腦的含量分別為16.34%、3.32%、5.92%。
　　采用納米粒度分析儀測定粒徑與Zeta電位，釆用指紋圖譜進行質量整體描述及工藝評價，并從包封率、載藥量、體外釋放度及穩(wěn)定性來評

4、價制劑的特性。
　　艾葉揮發(fā)油NLC平均粒徑為(72.33±1.93)nm，PDI為(0.273±0.0045)，Zeta電位為(-30.59±1.42)mv。桉油精、樟腦、龍腦包封率分別為87.49%、86.45%、92.12%，載藥量分別為8.25%、2.00%、3.38%。
　　指紋圖譜得出十批制劑的相似度均大于0.990，說明十批制劑一致性好，工藝質量穩(wěn)定。
　　從體外釋放度結果可知，在120h時，艾葉揮發(fā)油N

5、LC的釋放度為61.12%，而原料藥的釋放度為72.46%，相同時間制劑的釋放度比原料藥的低，說明艾葉揮發(fā)油NLC具有緩釋性。
　　藥物穩(wěn)定性實驗表明，艾葉揮發(fā)油NLC在高溫、強光照條件下易發(fā)生變化，應放置在4℃條件下避光保存。
　　2.艾葉揮發(fā)油與其NLC的藥代動力學及組織分布研究
　　本文首次建立了艾葉揮發(fā)油及NLC在血漿中桉油精含量的GC測定方法，并對其在大鼠體內的藥代動力學進行了研究。艾葉揮發(fā)油以1000mg/

6、kg的劑量灌胃、140mg/kg的劑量尾靜脈注射給藥，艾葉揮發(fā)油NLC以同等于艾葉揮發(fā)油劑量給藥，給藥后于不同時間點取血，GC法檢測桉油精的血藥濃度，采用DAS3.0藥代動力學軟件擬合，得藥代動力學參數。灌胃4h后，艾葉揮發(fā)油NLC達到最大血藥濃度(Cmax)11.4835μg/L，半衰期(t?)為8.727h，而艾葉揮發(fā)油Cmax為9.1064μg/L，t?為7.779h；艾葉揮發(fā)油 NLC灌胃后的藥時曲線面積AUC(0-∞)為160

7、.283μg/L?h，艾葉揮發(fā)油AUC(0-∞)為103.681μg/L?h。結果表明，艾葉揮發(fā)油 NLC延長了艾葉揮發(fā)油在體內的作用時間，提高了藥物生物利用度，改變了藥物的藥代動力學特征。
　　本文通過小動物活體成像跟蹤納米粒在不同時間不同組織中的分布情況。設立A、B、C三組，A組為生理鹽水組，B組為DiR染料組，C組為DiR-NLC組，于不同時間點麻醉，放置于小動物活體成像儀中進行觀察拍照，并于24h后取出裸鼠的心、肝、脾、肺

8、、腎各組織，放置到小動物活體成像儀中進行觀察拍照，研究納米粒在裸鼠體內不同組織中的分布情況。結果表明，隨著時間的延長，納米粒逐漸在肝部位蓄積，且從體外不同器官的熒光強度圖可知， DiR-NLC組肝臟部位熒光強度比染料組強，因此表明艾葉揮發(fā)油NLC具有肝臟靶向性。
　　3.艾葉揮發(fā)油及其NLC抗HBV藥效學研究
　　采用鴨乙肝病毒模型來觀察艾葉揮發(fā)油及其NLC的抗HBV作用。1日齡麻鴨正常飼養(yǎng)3天后靜脈注射含DHBV的強陽性血

9、清進行攻毒，7天后使用PCR法篩選出感染乙肝病毒的陽性鴨，然后取陽性鴨112只隨機分成8組，給予不同劑量的艾葉揮發(fā)油及NLC，連續(xù)給藥15天，于給藥后5d、10d、15d及停藥后3d檢測血清和肝臟組織中 DHBV DNA水平，評價艾葉揮發(fā)油及其 NLC的抗 HBV活性。結果表明，艾葉揮發(fā)油及NLC對鴨血清及肝臟組織中 HBV均有抑制作用，高劑量抑制作用更明顯，且艾葉揮發(fā)油NLC抑制作用比原料藥更顯著。
　　本文首次研究了艾葉揮發(fā)油