瑞舒伐他汀對(duì)大鼠阿霉素心肌損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：本研究通過建立阿霉素?cái)U(kuò)張型心肌病及慢性充血性心力衰竭大鼠模型，同時(shí)采用瑞舒伐他汀進(jìn)行干預(yù)，比較各組大鼠心肌損傷的各項(xiàng)病理指標(biāo)以及心肌細(xì)胞Cx43表達(dá)水平和分布情況，以期揭示Cx43蛋白及縫隙連接在阿霉素?fù)p傷性心肌病發(fā)生發(fā)展中的作用及瑞舒伐他汀改善心肌損傷的潛在機(jī)制，為臨床上采用他汀類藥物防治阿霉素的心臟毒性及各種擴(kuò)張型心肌病和心衰疾病提供更多的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：健康成年雄性SD大鼠隨機(jī)分為三組，每組8只:1）正常對(duì)照組(

2、Control):同樣的方式尾靜脈注射等量生理鹽水，并且用雙蒸水灌胃代替藥物治療;2）阿霉素組(ADM):隔日尾靜脈注射阿霉素，建立ADM-DCM大鼠模型，同時(shí)用雙蒸水灌胃代替藥物治療;3）瑞舒伐他汀+阿霉素組(ADM+RSV)，隔日尾靜脈注射阿霉素，注射阿霉素的同時(shí)口服灌胃瑞舒伐他汀持續(xù)3周。
　　實(shí)驗(yàn)期間，每天監(jiān)測(cè)大鼠的體重變化。三周后，對(duì)各組大鼠進(jìn)行經(jīng)胸心臟超聲心動(dòng)圖檢查，觀察大鼠心臟結(jié)構(gòu)及心功能變化，測(cè)量LVEDd、LVE

3、Ds、IVS、LVPW，并測(cè)定LVEF％、LVFS％等心功能指標(biāo)。檢測(cè)血液ALT、AST、LDH、CK、BNP、TC、TG、LDL-C、VLDL-C、HDL-C、TC/HDL-C和LDL-C/HDL-C等相關(guān)指標(biāo)。計(jì)算全心肥厚指數(shù)、左室肥厚指數(shù)、肝系數(shù)。采用HE染色觀察心臟及肝臟組織病理形態(tài)學(xué)變化，免疫組化染色法比較各組大鼠心肌Cx43表達(dá)及分布，TUNEL法評(píng)估大鼠心肌細(xì)胞凋亡比例，以及透射電鏡觀察心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變。
　　

4、結(jié)果：
　　1.一般情況
　　用藥后每天觀察大鼠的一般情況，ADM組大鼠表現(xiàn)出精神、進(jìn)食飲水及活性明顯下降，實(shí)驗(yàn)?zāi)┢谏踔脸霈F(xiàn)了眼球充血、腹瀉等癥狀，且死亡率明顯高于Control組和ADM+RSV組;ADM+RSV組雖然也出現(xiàn)了與ADM組類似的不良癥狀，但出現(xiàn)的時(shí)間較晚，且癥狀較輕。各組死亡率比較，ADM組與Control組比較，差異顯著，ADM+RSV組與Control組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但與ADM組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

5、義。
　　2.大鼠體重、心臟重量及心指數(shù)的變化
　　Control組的大鼠體重呈穩(wěn)定性增長，ADM組大鼠體重明顯下降，而ADM+RSV組大鼠體重下降趨勢(shì)顯著低于ADM組，較Control組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。ADM組大鼠的心臟重量特別是左心室的重量高于Control組，全心肥厚指數(shù)增高，肝系數(shù)相對(duì)正常對(duì)照組下降;而ADM+RSV組大鼠與ADM組比較心臟重量減輕。但以上差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.瑞舒伐他汀對(duì)阿霉素心肌損

6、傷心功能相關(guān)指標(biāo)的影響
　　ADM組大鼠ALT、AST、LDH、CK、BNP等指標(biāo)與正常對(duì)照組比較均明顯上升，而ADM+RSV組上述指標(biāo)較ADM組顯著下降。
　　4.瑞舒伐他汀對(duì)阿霉素心肌損傷血脂相關(guān)指標(biāo)的影響
　　ADM組TG、TC、LDL-C、VLDL-C和動(dòng)脈粥樣硬化指標(biāo)（TC/HDL-C和LDL-C/HDL-C）與Control組比較均增加，而ADM+RSV組的TG、TC、LDL-C、VLDL-C、TC/HDL

7、-C和LDL-C/HDL-C水平較ADM組下降，與Control組比較略低，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。ADM組HDL-C水平與Control組相比明顯下降，ADM+RSV組HDL-C水平的下降幅度減少，但各組間差異無顯著性。
　　5.心臟結(jié)構(gòu)及心功能改變
　　超聲心動(dòng)圖檢查結(jié)果顯示，ADM組大鼠LVEDd和LVEDs較Control組明顯增加，而LVEF％及LVFS％顯著降低。ADM+RSV組與ADM組比較其LVEF％及LVFS％水平

8、明顯升高，而LVEDd和LVEDs則顯著降低。
　　6.心肌組織病理學(xué)改變
　　Control組大鼠心臟組織結(jié)構(gòu)正常。ADM組大鼠心臟明顯增大，心臟表面可見灰白病變區(qū)域，兩心室腔擴(kuò)大明顯，可見心肌松弛、出血、肥大，肌纖維排列紊亂、肌纖維斷裂。心肌細(xì)胞核固縮，胞漿內(nèi)可見空泡形成;ADM+RSV組大鼠心臟體積較ADM組小，且病變區(qū)域少，心腔擴(kuò)張不明顯，心臟組織結(jié)構(gòu)基本正常，心肌肌纖維結(jié)構(gòu)清晰，細(xì)胞核完整。其次，ADM組大鼠肝臟損

9、傷嚴(yán)重，肝血竇可見大面積彌漫性出血，肝小葉結(jié)構(gòu)模糊，肝細(xì)胞出現(xiàn)濁腫變性，可見淋巴細(xì)胞聚集。而ADM+RSV組肝細(xì)胞損傷嚴(yán)重，可見彌漫性出血，肝細(xì)胞腫脹變性，空泡樣變，腫脹處肝細(xì)胞胞核染色加深，胞漿空亮。
　　7.瑞舒伐他汀對(duì)大鼠心肌組織Cx43表達(dá)及分布的影響
　　Control組Cx43免疫組化陽性顆粒規(guī)則排列，心肌細(xì)胞排列整齊、結(jié)構(gòu)完整。ADM組Cx43陽性顆粒表達(dá)明顯增強(qiáng)且排列紊亂，多位于心室肌細(xì)胞的側(cè)邊或胞內(nèi)，心肌組

10、織邊界模糊，損傷嚴(yán)重。與ADM組比較，ADM+RSV組的細(xì)胞Cx43表達(dá)降低，且Cx43陽性顆粒規(guī)則分布于閏盤處，與Control組結(jié)構(gòu)近似。半定量分析結(jié)果顯示ADM組Cx43陽性染色面積占總面積的百分比與Control組比較明顯增加，而RSV明顯降低了此百分比，且ADM+RSV組與Control組比較差異無顯著性。
　　8.瑞舒伐他汀對(duì)阿霉素?fù)p傷大鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響
　　Control組大鼠沒有或很少見凋亡的心肌細(xì)胞，而

11、在ADM組中可見很多凋亡的心肌細(xì)胞并且分布范圍較廣，ADM+RSV組心肌細(xì)胞凋亡情況與ADM組相比明顯減少。
　　9.透射電鏡觀察心肌細(xì)胞連接處超微結(jié)構(gòu)的變化:
　　Control組大鼠心肌細(xì)胞肌原纖維排列整齊，閏盤結(jié)構(gòu)完整連續(xù)，形成端-端連接。ADM組大鼠心肌細(xì)胞閏盤結(jié)構(gòu)模糊紊亂，局部可見中斷，縫隙連接分布紊亂，位于遠(yuǎn)離閏盤處，形成心肌細(xì)胞間的側(cè)-側(cè)連接。而ADM+RSV組閏盤結(jié)構(gòu)基本正常，縫隙連接分布規(guī)則，基本位于閏盤皺

12、褶處。
　　結(jié)論：
　　1.通過大鼠一般情況、全心肥厚指數(shù)、左心室肥厚指數(shù)、超聲心動(dòng)圖、心肌酶學(xué)、血清BNP水平、病理細(xì)胞形態(tài)學(xué)等指標(biāo)證實(shí)，阿霉素能誘發(fā)大鼠擴(kuò)張型心肌病。
　　2.阿霉素可引起大鼠心肌細(xì)胞Cx43表達(dá)異常增加且排列紊亂，提示大鼠阿霉素?fù)p傷心肌發(fā)生了Cx43縫隙連接重構(gòu)。
　　3.阿霉素誘導(dǎo)的擴(kuò)張型心肌病模型中出現(xiàn)心肌細(xì)胞凋亡，并且分布范圍較廣。提示阿霉素引起大鼠心肌細(xì)胞凋亡明顯增加。
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