瑞舒伐他汀對急性心肌梗死大鼠左心房交感神經(jīng)重構(gòu)的影響.pdf

1、背景：
　　急性心肌梗死是心血管病急癥，其高致死、致殘率嚴(yán)重危害人類健康。隨著我國近年來環(huán)境污染的加重，物質(zhì)生活水平的不斷提高，急性心肌梗死的發(fā)病漸趨年輕化。與其相關(guān)的基礎(chǔ)研究和臨床研究，都備受心血管專業(yè)學(xué)者的重視。心肌梗死可以引起各類心律失常且顯著導(dǎo)致患者心功能下降以及血流動(dòng)力學(xué)障礙，明顯增加患者死亡率，因此減少心肌梗死后心律失常等并發(fā)癥的發(fā)生一直是研究者關(guān)注的重點(diǎn)。眾多的研究均試圖尋找臨床常用藥物，用來防范心肌梗死后心律失常的

2、發(fā)生。心肌梗死后的心臟重構(gòu)是心律失常發(fā)生的重要基質(zhì)，心肌細(xì)胞壞死、凋亡，以及某些結(jié)締組織和非心肌細(xì)胞的異常增生均可導(dǎo)致心梗后心肌細(xì)胞代謝障礙以及心電生理的改變，是心臟重構(gòu)的主要特征性表現(xiàn)。超聲下表現(xiàn)為心臟室壁變薄、運(yùn)動(dòng)減弱消失甚至反向運(yùn)動(dòng)等。近年來，心梗后心室重構(gòu)導(dǎo)致室性心律失常的研究比較多見，心梗后左側(cè)星狀神經(jīng)節(jié)及心房神經(jīng)重構(gòu)的相關(guān)研究偶有報(bào)道，但是探討心肌梗死后左側(cè)星狀神經(jīng)節(jié)重構(gòu)及其與心房神經(jīng)重構(gòu)關(guān)系的研究國內(nèi)外未見報(bào)道。有研究表明

3、，患者發(fā)生心肌梗死后，特別是左室射血分?jǐn)?shù)減低的患者房顫發(fā)生率較高，且死亡率較左心室收縮功能正常者高3倍。房顫發(fā)生的主要基質(zhì)是心房重構(gòu)，所以房顫發(fā)生及維持機(jī)制研究的基礎(chǔ)之一是心房重構(gòu)的研究。目前觀點(diǎn)認(rèn)為心房的重構(gòu)包括:結(jié)構(gòu)重構(gòu)、電重構(gòu)以及神經(jīng)重構(gòu)。進(jìn)一步明確心梗后心房重構(gòu)的發(fā)生及其機(jī)制，可以為心梗后房性心律失常的預(yù)防及診療提供理論依據(jù)。
　　他汀類藥物是臨床常用的調(diào)脂藥物，近年來對其研究的熱點(diǎn)主要集中在其作用機(jī)制的多效性，如抗炎、抗

4、氧化、預(yù)防血栓形成;保護(hù)內(nèi)皮功能、損傷心肌的保護(hù);預(yù)防心律失常發(fā)生等多個(gè)方面。其中，我們團(tuán)隊(duì)在近年來對他汀類藥物預(yù)防心律失常以及抗心臟重構(gòu)的作用方面開展了多項(xiàng)研究。本研究的出發(fā)點(diǎn)就是結(jié)合團(tuán)隊(duì)的既往研究結(jié)果，探討心肌梗死后左心房發(fā)生神經(jīng)重構(gòu)的機(jī)制以及與左側(cè)星狀神經(jīng)節(jié)重構(gòu)的關(guān)系，試圖闡明他汀類藥物在預(yù)防神經(jīng)重構(gòu)中的作用及其機(jī)制。
　　目的：
　　本研究旨在探討心肌梗死后左心房交感神經(jīng)分布的重構(gòu)及其可能機(jī)制;心肌梗死后左側(cè)星狀神經(jīng)

5、節(jié)的神經(jīng)重構(gòu)以及其與心臟神經(jīng)重構(gòu)的關(guān)系;調(diào)脂藥瑞舒伐他汀鈣干預(yù)對心肌梗死后心房交感神經(jīng)重構(gòu)產(chǎn)生的作用及其作用機(jī)制。
　　方法：
　　自山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院動(dòng)物中心選購80只健康Wistar大鼠（SPF級），均為雄性，體重250±30g。于山東大學(xué)千佛山醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心實(shí)驗(yàn)室喂養(yǎng)2周，以適應(yīng)環(huán)境。大鼠心肌梗死模型制作采用結(jié)扎冠狀動(dòng)脈前降支的方法。術(shù)前所有大鼠均需行常規(guī)心電圖檢查。麻醉用10％水合氯醛(2ml/kg)經(jīng)大鼠腹腔

6、緩慢注射，當(dāng)大鼠四肢癱軟、各種反射消失時(shí)，提示此次麻醉成功。麻醉成功后將大鼠固定于小型動(dòng)物手術(shù)臺上。常規(guī)備皮和消毒，行氣管插管，小動(dòng)物呼吸機(jī)輔助呼吸，術(shù)者戴無菌手套后鋪洞巾。沿胸骨左側(cè)第3、4肋間斜行切開皮膚，鈍性分離皮下組織及肌肉，游離出長約4cm左右切口后，小心地分離肋間肌，謹(jǐn)慎的借助眼瞼撐開器撐開肋間隙，待到心臟充分顯露，鑷子輕輕夾起心包壁層并撕開，由大鼠胸廓兩側(cè)稍用力擠壓胸腔以使心臟冠狀動(dòng)脈前降支顯露充分，確認(rèn)分辨出大鼠左冠狀動(dòng)

7、脈及其分支的走行位置后，在肺動(dòng)脈根部及左心耳之間找到冠狀動(dòng)脈前降支，用6-0縫合線其于中上1/3處縫扎。3分鐘后可肉眼觀察到結(jié)扎血管遠(yuǎn)端心肌顏色逐漸由鮮紅變暗乃至蒼白色，局部心肌運(yùn)動(dòng)減弱或消失，偶可見左心房充血膨脹。10min后再次行心電圖檢查以明確心肌梗死發(fā)生。手術(shù)完成后，逐層縫合關(guān)胸，胸腔留置導(dǎo)管抽吸積血及氣體，促進(jìn)肺復(fù)張。密切觀察至大鼠在保溫箱蘇醒后送回飼養(yǎng)室喂養(yǎng)。同時(shí)為避免各種操作引起大鼠感染，術(shù)后30min給予所有實(shí)驗(yàn)大鼠青霉

8、素40萬單位腹腔注射，2次/日，連續(xù)使用3天。手術(shù)24h后將仍存活的心肌梗死大鼠隨機(jī)分為心肌梗死組和瑞舒伐他汀鈣干預(yù)組。假手術(shù)組大鼠僅冠狀動(dòng)脈相同位置下穿線，但不結(jié)扎。自術(shù)后24h開始，藥物干預(yù)組給予生理鹽水溶解的瑞舒伐他汀鈣（10mg/kg/d，無錫阿斯利康制藥生產(chǎn)）灌胃4周，心梗組及假手術(shù)組以等量生理鹽水灌胃4周。最終共有57只大鼠獲得完整實(shí)驗(yàn)資料，分別為:心梗組(I，n-17)、藥物干預(yù)組(R，n=19)、假手術(shù)組(S，n=21)

9、。4周后各組大鼠稱取體重，應(yīng)用相同劑量及濃度的水合氯醛進(jìn)行腹腔注射麻醉后再次手術(shù)留取標(biāo)本，步驟同前。打開胸腔后，可見心臟局部與胸壁縱膈粘連，且前壁與心尖部位搏動(dòng)明顯較其他部位減弱或消失，室壁變薄。術(shù)中仔細(xì)分離心臟周圍組織，大血管用縫線結(jié)扎后遠(yuǎn)心端剪斷，快速取出大鼠心臟，用無菌生理鹽水立即沖洗，上述步驟均在冰上操作。仔細(xì)分離出左心房并保留，去除其余部分。同時(shí)認(rèn)真分離左側(cè)頸部組織，找到左側(cè)星狀神經(jīng)節(jié)，離斷取出后生理鹽水沖洗。熒光定量PCR法

10、檢測神經(jīng)生長因子(nerve growth factor，NGF)及生長相關(guān)蛋白-43（growth association protein-43，GAP43）mRNA表達(dá)水平;Western Blot法和免疫組織化學(xué)法檢測NGF和GAP43的蛋白表達(dá)量。
　　結(jié)果：
　　1.免疫組織化學(xué)檢測顯示，與S組比較，I組大鼠左側(cè)星狀神經(jīng)節(jié)中NGF(0.081±0.052 vs.0.005±0.007)及GAP43(0.057±0.

11、027 vs.0.027±0.002)陽性染色物質(zhì)平均光密度值均明顯增加(P＜0.01)，R組大鼠LSG組織中NGF(0.062±0.027 vs.0.005±0.007)及GAP43(0.046±0.038 vs.0.027±0.020)陽性染色物質(zhì)平均光密度值均明顯增加(P＜0.01)，神經(jīng)纖維增粗分布紊亂;R組的NGF和GAP43表達(dá)均顯著低于I組(P＜0.05)。
　　2.免疫組織化學(xué)檢測顯示，與S組比較，I組大鼠心房組織

12、中NGF(0.017±0.015vs.0.003±0.003)及GAP43(0.064±0.041 vs.0.012±0.011)陽性染色物質(zhì)平均光密度值均明顯增加(P＜0.01)，R組大鼠心房組織中NGF(0.010±0.005 vs.0.003±0.003)及GAP43(0.045±0.024 vs.0.012±0.011)陽性染色物質(zhì)平均光密度值均明顯增加(P＜0.01);且R組的NGF和GAP43表達(dá)均顯著低于I組(P＜0.05

13、)。
　　3.Western Blot檢測顯示，與S組比較，R組和I組大鼠LSG內(nèi)(0.870±0.048&0.932±0.029 vs.0.745±0.036)及心房組織內(nèi)(0.022±0.007&0.034±0.005 vs.0.016±0.005) GAP43蛋白表達(dá)均有增高(P＜0.01)，且R組較I組降低(P＜0.01);R組和I組大鼠心房組織內(nèi)NGF蛋白表達(dá)較S組均有增高(0.379±0.054&0.386±0.051

14、 vs0.258±0.056，P＜0.01)，但R組與I組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;R組和I組大鼠左側(cè)星狀神經(jīng)節(jié)內(nèi)NGF蛋白表達(dá)較S組均有增高(0.835±0.052&0.848±0.034 vs0.723±0.029，P＜0.01)，但是R組與I組差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4.熒光定量PCR檢測顯示，與S組比較，R組和I組大鼠LSG內(nèi)GAP43 mRNA表達(dá)增高(0.762±0.040&0.913±0.051 vs.0.385±0.039

15、，P＜0.01)，且R組較I組降低(P＜0.01);三組LSG內(nèi)NGF mRNA表達(dá)差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。心房組織內(nèi)，R組和I組NGF mRNA表達(dá)較S組增加(0.231±0.038&0.261±0.038 vs.0.192±0.033，P＜0.01)，R組較I組降低(P＜0.01);三組GAP43 mRNA表達(dá)未見差別。
　　結(jié)論：
　　1.心肌梗死后大鼠左側(cè)星狀神經(jīng)節(jié)及左心房內(nèi)促交感神經(jīng)重構(gòu)的NGF、GAP43表達(dá)明顯增加，

16、且交感神經(jīng)纖維增粗、分布紊亂。
　　2.心肌梗死后大鼠左側(cè)星狀神經(jīng)節(jié)出現(xiàn)的交感神經(jīng)過度分布與該處NGF及GAP43蛋白的合成增加有關(guān)。
　　3.心梗后大鼠左心房中增加的神經(jīng)生長因子、GAP43蛋白在左心房交感神經(jīng)重構(gòu)過程中起到促進(jìn)作用。心肌梗死后大鼠左心房升高的GAP43蛋白由左側(cè)星狀神經(jīng)節(jié)順交感神經(jīng)節(jié)后纖維順向傳遞而來，加速了左心房的交感神經(jīng)重構(gòu)。
　　4.心肌梗死后大鼠接受瑞舒伐他汀鈣干預(yù)可明顯改善左側(cè)星狀神經(jīng)節(jié)及