瑞舒伐他汀對急性心肌梗死大鼠左心房交感神經重構的影響.pdf

1、背景：
　　急性心肌梗死是心血管病急癥，其高致死、致殘率嚴重危害人類健康。隨著我國近年來環(huán)境污染的加重，物質生活水平的不斷提高，急性心肌梗死的發(fā)病漸趨年輕化。與其相關的基礎研究和臨床研究，都備受心血管專業(yè)學者的重視。心肌梗死可以引起各類心律失常且顯著導致患者心功能下降以及血流動力學障礙，明顯增加患者死亡率，因此減少心肌梗死后心律失常等并發(fā)癥的發(fā)生一直是研究者關注的重點。眾多的研究均試圖尋找臨床常用藥物，用來防范心肌梗死后心律失常的

2、發(fā)生。心肌梗死后的心臟重構是心律失常發(fā)生的重要基質，心肌細胞壞死、凋亡，以及某些結締組織和非心肌細胞的異常增生均可導致心梗后心肌細胞代謝障礙以及心電生理的改變，是心臟重構的主要特征性表現(xiàn)。超聲下表現(xiàn)為心臟室壁變薄、運動減弱消失甚至反向運動等。近年來，心梗后心室重構導致室性心律失常的研究比較多見，心梗后左側星狀神經節(jié)及心房神經重構的相關研究偶有報道，但是探討心肌梗死后左側星狀神經節(jié)重構及其與心房神經重構關系的研究國內外未見報道。有研究表明

3、，患者發(fā)生心肌梗死后，特別是左室射血分數(shù)減低的患者房顫發(fā)生率較高，且死亡率較左心室收縮功能正常者高3倍。房顫發(fā)生的主要基質是心房重構，所以房顫發(fā)生及維持機制研究的基礎之一是心房重構的研究。目前觀點認為心房的重構包括:結構重構、電重構以及神經重構。進一步明確心梗后心房重構的發(fā)生及其機制，可以為心梗后房性心律失常的預防及診療提供理論依據(jù)。
　　他汀類藥物是臨床常用的調脂藥物，近年來對其研究的熱點主要集中在其作用機制的多效性，如抗炎、抗

4、氧化、預防血栓形成;保護內皮功能、損傷心肌的保護;預防心律失常發(fā)生等多個方面。其中，我們團隊在近年來對他汀類藥物預防心律失常以及抗心臟重構的作用方面開展了多項研究。本研究的出發(fā)點就是結合團隊的既往研究結果，探討心肌梗死后左心房發(fā)生神經重構的機制以及與左側星狀神經節(jié)重構的關系，試圖闡明他汀類藥物在預防神經重構中的作用及其機制。
　　目的：
　　本研究旨在探討心肌梗死后左心房交感神經分布的重構及其可能機制;心肌梗死后左側星狀神經

5、節(jié)的神經重構以及其與心臟神經重構的關系;調脂藥瑞舒伐他汀鈣干預對心肌梗死后心房交感神經重構產生的作用及其作用機制。
　　方法：
　　自山東中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院動物中心選購80只健康Wistar大鼠（SPF級），均為雄性，體重250±30g。于山東大學千佛山醫(yī)院動物實驗中心實驗室喂養(yǎng)2周，以適應環(huán)境。大鼠心肌梗死模型制作采用結扎冠狀動脈前降支的方法。術前所有大鼠均需行常規(guī)心電圖檢查。麻醉用10％水合氯醛(2ml/kg)經大鼠腹腔

6、緩慢注射，當大鼠四肢癱軟、各種反射消失時，提示此次麻醉成功。麻醉成功后將大鼠固定于小型動物手術臺上。常規(guī)備皮和消毒，行氣管插管，小動物呼吸機輔助呼吸，術者戴無菌手套后鋪洞巾。沿胸骨左側第3、4肋間斜行切開皮膚，鈍性分離皮下組織及肌肉，游離出長約4cm左右切口后，小心地分離肋間肌，謹慎的借助眼瞼撐開器撐開肋間隙，待到心臟充分顯露，鑷子輕輕夾起心包壁層并撕開，由大鼠胸廓兩側稍用力擠壓胸腔以使心臟冠狀動脈前降支顯露充分，確認分辨出大鼠左冠狀動

7、脈及其分支的走行位置后，在肺動脈根部及左心耳之間找到冠狀動脈前降支，用6-0縫合線其于中上1/3處縫扎。3分鐘后可肉眼觀察到結扎血管遠端心肌顏色逐漸由鮮紅變暗乃至蒼白色，局部心肌運動減弱或消失，偶可見左心房充血膨脹。10min后再次行心電圖檢查以明確心肌梗死發(fā)生。手術完成后，逐層縫合關胸，胸腔留置導管抽吸積血及氣體，促進肺復張。密切觀察至大鼠在保溫箱蘇醒后送回飼養(yǎng)室喂養(yǎng)。同時為避免各種操作引起大鼠感染，術后30min給予所有實驗大鼠青霉

8、素40萬單位腹腔注射，2次/日，連續(xù)使用3天。手術24h后將仍存活的心肌梗死大鼠隨機分為心肌梗死組和瑞舒伐他汀鈣干預組。假手術組大鼠僅冠狀動脈相同位置下穿線，但不結扎。自術后24h開始，藥物干預組給予生理鹽水溶解的瑞舒伐他汀鈣（10mg/kg/d，無錫阿斯利康制藥生產）灌胃4周，心梗組及假手術組以等量生理鹽水灌胃4周。最終共有57只大鼠獲得完整實驗資料，分別為:心梗組(I，n-17)、藥物干預組(R，n=19)、假手術組(S，n=21)

9、。4周后各組大鼠稱取體重，應用相同劑量及濃度的水合氯醛進行腹腔注射麻醉后再次手術留取標本，步驟同前。打開胸腔后，可見心臟局部與胸壁縱膈粘連，且前壁與心尖部位搏動明顯較其他部位減弱或消失，室壁變薄。術中仔細分離心臟周圍組織，大血管用縫線結扎后遠心端剪斷，快速取出大鼠心臟，用無菌生理鹽水立即沖洗，上述步驟均在冰上操作。仔細分離出左心房并保留，去除其余部分。同時認真分離左側頸部組織，找到左側星狀神經節(jié)，離斷取出后生理鹽水沖洗。熒光定量PCR法

10、檢測神經生長因子(nerve growth factor，NGF)及生長相關蛋白-43（growth association protein-43，GAP43）mRNA表達水平;Western Blot法和免疫組織化學法檢測NGF和GAP43的蛋白表達量。
　　結果：
　　1.免疫組織化學檢測顯示，與S組比較，I組大鼠左側星狀神經節(jié)中NGF(0.081±0.052 vs.0.005±0.007)及GAP43(0.057±0.

11、027 vs.0.027±0.002)陽性染色物質平均光密度值均明顯增加(P＜0.01)，R組大鼠LSG組織中NGF(0.062±0.027 vs.0.005±0.007)及GAP43(0.046±0.038 vs.0.027±0.020)陽性染色物質平均光密度值均明顯增加(P＜0.01)，神經纖維增粗分布紊亂;R組的NGF和GAP43表達均顯著低于I組(P＜0.05)。
　　2.免疫組織化學檢測顯示，與S組比較，I組大鼠心房組織

12、中NGF(0.017±0.015vs.0.003±0.003)及GAP43(0.064±0.041 vs.0.012±0.011)陽性染色物質平均光密度值均明顯增加(P＜0.01)，R組大鼠心房組織中NGF(0.010±0.005 vs.0.003±0.003)及GAP43(0.045±0.024 vs.0.012±0.011)陽性染色物質平均光密度值均明顯增加(P＜0.01);且R組的NGF和GAP43表達均顯著低于I組(P＜0.05

13、)。
　　3.Western Blot檢測顯示，與S組比較，R組和I組大鼠LSG內(0.870±0.048&0.932±0.029 vs.0.745±0.036)及心房組織內(0.022±0.007&0.034±0.005 vs.0.016±0.005) GAP43蛋白表達均有增高(P＜0.01)，且R組較I組降低(P＜0.01);R組和I組大鼠心房組織內NGF蛋白表達較S組均有增高(0.379±0.054&0.386±0.051

14、 vs0.258±0.056，P＜0.01)，但R組與I組差異無統(tǒng)計學意義;R組和I組大鼠左側星狀神經節(jié)內NGF蛋白表達較S組均有增高(0.835±0.052&0.848±0.034 vs0.723±0.029，P＜0.01)，但是R組與I組差別無統(tǒng)計學意義。
　　4.熒光定量PCR檢測顯示，與S組比較，R組和I組大鼠LSG內GAP43 mRNA表達增高(0.762±0.040&0.913±0.051 vs.0.385±0.039

15、，P＜0.01)，且R組較I組降低(P＜0.01);三組LSG內NGF mRNA表達差別無統(tǒng)計學意義。心房組織內，R組和I組NGF mRNA表達較S組增加(0.231±0.038&0.261±0.038 vs.0.192±0.033，P＜0.01)，R組較I組降低(P＜0.01);三組GAP43 mRNA表達未見差別。
　　結論：
　　1.心肌梗死后大鼠左側星狀神經節(jié)及左心房內促交感神經重構的NGF、GAP43表達明顯增加，

16、且交感神經纖維增粗、分布紊亂。
　　2.心肌梗死后大鼠左側星狀神經節(jié)出現(xiàn)的交感神經過度分布與該處NGF及GAP43蛋白的合成增加有關。
　　3.心梗后大鼠左心房中增加的神經生長因子、GAP43蛋白在左心房交感神經重構過程中起到促進作用。心肌梗死后大鼠左心房升高的GAP43蛋白由左側星狀神經節(jié)順交感神經節(jié)后纖維順向傳遞而來，加速了左心房的交感神經重構。
　　4.心肌梗死后大鼠接受瑞舒伐他汀鈣干預可明顯改善左側星狀神經節(jié)及