急性子抗腫瘤活性成分與主要成分的含量測(cè)定.pdf

1、急性子(SemenImpatientis)為鳳仙花科鳳仙花屬(Impatiens)鳳仙花(ImpatiensbalsaminaL.)的干燥成熟種子。夏、秋季果實(shí)成熟而未開(kāi)裂時(shí)采收,曬干,搓出種子,除去果皮及雜質(zhì)而得。其味苦,辛,性溫,有小毒,具有破血軟堅(jiān),消積的功效,臨床上用于避孕,食管賁門(mén)癌及梗阻、腫瘤,經(jīng)閉等。國(guó)內(nèi)外對(duì)鳳仙花的花的化學(xué)成分研究報(bào)道較多,對(duì)急性子的研究報(bào)道相對(duì)較少。為了研究急性子是否具有抗腫瘤作用,充分利用我國(guó)的豐富資

2、源,發(fā)揮我國(guó)歷史悠久的中藥文化的優(yōu)勢(shì),尋找其有效成分,對(duì)其抗腫瘤活性成分和主要化學(xué)成分的含量測(cè)定進(jìn)行了初步研究。
　　 作者采用溶劑提取、萃取、硅膠柱層析、SephadexLH-20柱層析、ODS柱層析和MCI柱層析以及重結(jié)晶等方法,較為系統(tǒng)的研究了急性子的化學(xué)成分。從其80％和60％的乙醇提取物中分離純化得到10個(gè)化合物,根據(jù)理化性質(zhì),應(yīng)用MS,1HNMR,13CNMR,DEPT,HSQC,HMBC,NOESY等波譜方法鑒定了

3、9個(gè)。包括3個(gè)萘醌類(lèi)化合物:balsaminonesA(5-hydroxy-6-methoxy-dinaphtho[1,2-b:2’,3’-d]furan-7,12-dione,Ib-1)、balsaminonesB-(5-β-D-glucosyloxy-6-memoxy-dinaphtho[1,2-b:2’,3'-d]furan-7,12-dione,Ib-2)、balsaminonesC(6-hydroxy-6-acetonyl-d

4、inaphtho[1,2-b:2’,3’-d]furan-5,7,12-triktone,Ib-3),4個(gè)三萜皂苷類(lèi)化合物:鳳仙萜四醇苷A(hosenkosideA,Ib-4)、鳳仙萜四醇苷B(hosenkosideB,Ib-5)、風(fēng)仙萜四醇苷C(hosenkosideC,Ib-6)、鳳仙萜四醇苷D(hosenkosideD,Ib-7),2個(gè)黃酮類(lèi)化合物:槲皮素-3-O-[α-L-鼠李糖-(1→2)-β-D-葡萄糖]-5-O-β-D-葡

5、萄糖苷{(diào)quercetin-3-O-[α-L-rhamnose-(1→2)-β-D-glucopyranosyl]-5-O-β-D-glucopyranoside,Ib-8}、槲皮素-3-O-[(6"'-O-咖啡酸酯)-α-L-鼠李糖-(1→2)-β-D-葡萄糖]-5-O-β-D-葡萄糖{quercetin-3-O-[(6"'-O-caffeoyl)-α-L-rhamnose-(1→2)-β-D-glucopyranosyl]-5-O-

6、β-D-glucopyranoside,Ib-9}。其中化合物Ib-3,為新化合物。
　　 目前急性子抗腫瘤作用的研究尚未見(jiàn)報(bào)道,本研究以人肺癌A549細(xì)胞株和人宮頸癌Hela細(xì)胞株為試驗(yàn)對(duì)象,采用MTT法對(duì)從急性子中分離得到的鳳仙萜四醇苷類(lèi)化合物、雙萘呋喃-7,12-酮類(lèi)化合物和黃酮苷類(lèi)化合物進(jìn)行體外抗腫瘤活性篩選。首次發(fā)現(xiàn)從急性子中分離得到的鳳仙萜四醇苷類(lèi)化合物、雙萘呋喃-7,12-酮類(lèi)化合物和黃酮苷類(lèi)化合物均對(duì)A549腫瘤

7、細(xì)胞具有一定的抑制作用。其中,鳳仙萜四醇苷C的IC50為68.16μmol·L-1,鳳仙萜四醇苷A、B、D的IC50均＞80μmol·L-1。新化合物balsaminoneC的IC50達(dá)到9.356μmol·L-1,balsaminoneA的IC50達(dá)到19.046μumol·L-1,blsaminoneB的IC50達(dá)到57.725μmol·L-1。槲皮素-3-O-[α-L-鼠李糖-(1→2)-β-D-葡萄糖]-5-O-β-D-葡萄糖苷

8、和槲皮素-3-O-(6"'-O-咖啡酸酯)-α-L-鼠李糖-(1→2)-β-D-葡萄糖]-5-O-β-D-葡萄糖對(duì)A549和Hela細(xì)胞的IC50均＞100μmol·L-1。采用流式細(xì)胞儀測(cè)定鳳仙萜四醇苷類(lèi)和雙萘呋喃-7,12-酮類(lèi)化合物對(duì)A549細(xì)胞周期的影響,實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)鳳仙萜四醇苷A使A549細(xì)胞S期細(xì)胞比例較正常對(duì)照組增加,G2/M期細(xì)胞比例較正常對(duì)照組減少,且隨著濃度的增加呈現(xiàn)一定的規(guī)律,G0/G1期細(xì)胞比例沒(méi)有變化。鳳仙萜四醇苷

9、B和風(fēng)仙萜四醇苷C作用于A549細(xì)胞,G0/G1、S、G2/M期細(xì)胞比例變化不大。BalsaminoneB作用48h對(duì)G2/M期細(xì)胞比例變化不大,G0/G1期細(xì)胞比例減少,S期細(xì)胞比例明顯升高,且呈明顯的劑量依賴性(P＜0.05),而balsaminoneA作用48h使G0/G1期細(xì)胞的比例減少,S期和G2/M期細(xì)胞比例升高,但無(wú)明顯的劑量依賴性。下一步我們還將進(jìn)一步明確急性子抗腫瘤更多的有效成分以及更多的作用機(jī)制。
　　 對(duì)急

10、性子藥材中主要成分進(jìn)行含量測(cè)定,首次建立HPLC-ELsD同時(shí)測(cè)定急性子藥材中鳳仙萜四醇苷A、B、C、D4種成分含量的方法,首次采用RP-HPLC測(cè)定急性子藥材中槲皮素-3-O-(6"'-O-咖啡酸酯)-α-L-鼠李糖-(1→2)-β-D-葡萄糖基]-5-O-β-D-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-[α-L-鼠李糖-(1→2)-β-D-葡萄糖基]-5-O-β-D-葡萄糖苷和balsaminoneA、balsaminoneB的含量,填補(bǔ)了目前急