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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
探究經(jīng)4Gy X射線(xiàn)照射后的人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC),硫酸鎂對(duì)其細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡率的影響,而且探討分析其可能的分子機(jī)制。同時(shí)研究硫酸鎂對(duì)HUVEC中抗凋亡蛋白Bcl-2 mRNA和蛋白表達(dá)水平的影響。
方法:
1.選取符合實(shí)驗(yàn)要求的HUVEC,采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)硫酸鎂對(duì)經(jīng)X射線(xiàn)照射后不同時(shí)間HUVEC細(xì)胞周期分布的影響;周期蛋白CyclinB1采用流式細(xì)胞術(shù)和免疫印跡法檢測(cè)。
2、2.HUVEC細(xì)胞凋亡率的測(cè)定,采用膜聯(lián)蛋白雙染法(Annexin V/PI);Bcl-2、P53蛋白采用免疫印跡法檢測(cè);Bcl-2 mRNA的檢測(cè)則采用Real Time-PCR法。
3.IκB-α蛋白的表達(dá),使用免疫印跡法測(cè)定其變化;IκB-αmRNA的表達(dá),使用Real Time-PCR法測(cè)定其變化。
4.數(shù)據(jù)均選用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表現(xiàn),使用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件,t檢驗(yàn)對(duì)比組間差異。P<0.05為差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)
3、意義。
結(jié)果:
1.前期試驗(yàn)結(jié)果顯示:對(duì)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞而言,硫酸鎂的濃度為1.25mg/mL時(shí),是無(wú)毒性的,且X射線(xiàn)照射后,該濃度的硫酸鎂能使細(xì)胞的存活率增加[26]。
2.經(jīng)X射線(xiàn)照射后,HUVEC會(huì)出現(xiàn)G2/M期阻滯,而1.25mg/mL硫酸鎂能使其阻滯程度降低。流式細(xì)胞術(shù)和western blot檢測(cè)均提示:較單純照射組相比,照射加藥組24h CyclinB1蛋白表達(dá)量有一定的升高。
4、3.與空白對(duì)照組相比,X射線(xiàn)照射組細(xì)胞凋亡率均有不同程度的增加,照射加藥組與單純照射組比較,HUVEC細(xì)胞凋亡率增加,提示硫酸鎂的濃度在1.25mg/mL時(shí),對(duì)X射線(xiàn)照射后的HUVEC,可能促進(jìn)其凋亡。
4.Real-Time PCR結(jié)果顯示,X射線(xiàn)增加抗凋亡蛋白Bcl-2 mRNA的表達(dá),而1.25mg/ml硫酸鎂能降低其表達(dá)水平;免疫印跡法提示單純照射48h、72h后,Bcl-2蛋白的表達(dá)增加,1.25mg/mL硫酸鎂能降
5、低Bcl-2蛋白的表達(dá);免疫印跡法檢測(cè)提示單純照射72h后,蛋白P53表達(dá)量明顯增加;與單純照射組相比,照射72h后HUVEC的P53蛋白的表達(dá),硫酸鎂可以促進(jìn)其蛋白水平的增加。
5.Real Time PCR檢測(cè)提示,X射線(xiàn)能促進(jìn)HUVEC中IκB-αmRNA的表達(dá),而1.25mg/mL硫酸鎂作用后,能促使其表達(dá)減少;western blot法提示單純照射24h、48h后,IκB-α蛋白的表達(dá)增加,72h IκB-α的表達(dá)下
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