尿酸與人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞功能的體外研究.pdf

1、目的：通過(guò)不同濃度尿酸(UA)對(duì)人體臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)的體外刺激，測(cè)定氧化產(chǎn)物ROS和抗氧化反應(yīng)中人內(nèi)皮細(xì)胞一氧化氮合成酶(eNOS)mRNA的表達(dá)情況，初步測(cè)定體外一定濃度尿酸刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞一定時(shí)間后，對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響。 方法：MTT細(xì)胞活力檢測(cè)實(shí)驗(yàn)測(cè)定不同時(shí)間經(jīng)不同濃度尿酸培養(yǎng)HUVEC之間活力的差異；共聚焦熒光顯微鏡檢測(cè)不同濃度尿酸刺激HUVEC 48小時(shí)后細(xì)胞ROS的表達(dá)；流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同濃度尿酸刺激H

2、UVEC 48小時(shí)后細(xì)胞ROS的表達(dá)；RT-PCR檢測(cè)不同濃度尿酸刺激HUVEC 48小時(shí)候后eNOS mRNA的表達(dá)水平；Real-Time PCR檢測(cè)不同濃度尿酸刺激HUVEC 48小時(shí)候后eNOS mRNA的表達(dá)水平。 結(jié)果：在不同濃度尿酸(0、S、10、20和30mg/dL)中培養(yǎng)不同時(shí)間(8、12、24和48h)之后，MTT檢測(cè)發(fā)現(xiàn)第8h和12h時(shí)各個(gè)尿酸濃度組HUVEC的活力之間沒(méi)有差異，第24h和48h時(shí)各個(gè)尿酸濃

3、度組HUVEC的活力較對(duì)照組有顯著降低(P<0.05)。HUVEC經(jīng)體外不同濃度尿酸(0、5、10、20和30mg/dL)刺激48h后，經(jīng)激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)發(fā)現(xiàn)HUVEC胞漿中DCFDA探針標(biāo)記的ROS表達(dá)灰度強(qiáng)度與尿酸刺激濃度呈顯著正相關(guān)(P<0.001)。同時(shí)HUVEC經(jīng)體外不同濃度尿酸(0、5、10、20、30mg/dL)刺激48h后，采用RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞中eNOS mRNA的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)eNOS mRNA的表達(dá)強(qiáng)度與尿酸培養(yǎng)

4、濃度亦呈顯著正相關(guān)(P<0.05)。 結(jié)論：初步研究發(fā)現(xiàn)，體外HUVEC在不同濃度尿酸中培養(yǎng)不同時(shí)間后，MTT法測(cè)得第24h和48h時(shí)各個(gè)尿酸濃度組HUVEC的活力較對(duì)照組有顯著降低。體外實(shí)驗(yàn)中，隨著外源性尿酸濃度升高，HUVEC胞漿中ROS的表達(dá)程度升高，提示高濃度外源性尿酸刺激對(duì)HUVEC內(nèi)皮細(xì)胞功能可能具有損傷作用。體外HUVEC被不同濃度尿酸刺激后eNOS mRNA表達(dá)增加，不排除是機(jī)體對(duì)尿酸激活ROS后產(chǎn)生的抗氧化反應(yīng)