油酰乙醇胺抗炎及神經(jīng)血管修復(fù)的作用研究.pdf

1、研究背景:油酰乙醇胺(OEA)是一種天然存在于組織和循環(huán)血液中的脂肪酸乙醇胺類化合物，研究發(fā)現(xiàn)OEA具有調(diào)節(jié)飲食及葡萄糖穩(wěn)態(tài)、影響脂質(zhì)代謝、抗動(dòng)脈粥樣硬化和神經(jīng)保護(hù)等多種生物學(xué)作用。其中動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展過(guò)程是一種炎癥反應(yīng)過(guò)程，我們研究發(fā)現(xiàn)OEA可以通過(guò)激活過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體-α(PPAR-α)，抑制Toll樣受體4(TLR4)的表達(dá)，從而減輕細(xì)菌脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的人急性白血病單核細(xì)胞(THP-1)的炎癥反應(yīng)。但是OEA具

2、體的抗炎機(jī)制尚不清楚。另腦卒中是一種神經(jīng)功能缺損的常見(jiàn)腦血管疾病，我們研究發(fā)現(xiàn)OEA可促進(jìn)大鼠缺血性腦卒中慢性期海馬的神經(jīng)發(fā)生，改善大鼠腦缺血后的認(rèn)知功能，發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。而OEA是否對(duì)腦缺血后皮層區(qū)有神經(jīng)保護(hù)作用尚不清楚，因此本論文對(duì)此展開(kāi)了研究。
　　研究目的:
　　1.探究在LPS誘導(dǎo)的THP-1細(xì)胞中OEA具體的抗炎機(jī)制。
　　2.探究OEA對(duì)大鼠腦卒中后損傷側(cè)皮層區(qū)神經(jīng)血管的保護(hù)作用。
　　研究方法:

3、
　　1.通過(guò)Western Blot以及熒光定量PCR方法，檢測(cè)LPS誘導(dǎo)的THP-1細(xì)胞中，TLR4下游信號(hào)通路NF-κB以及MAPK信號(hào)通路中的相關(guān)蛋白表達(dá)，探究OEA的抗炎機(jī)制。
　　2.通過(guò)大腦中動(dòng)脈阻斷法(MCAO)，建立大鼠右側(cè)短暫局灶性腦缺血模型，選用成年雄性SD大鼠(250-280 g)，隨機(jī)分為Sham組、Model組、O10(OEA-10mg/kg)組、O30(OEA-30mg/kg)組。分別于術(shù)后7天

4、，14天，21天，28天以及35天檢測(cè)大鼠各組抓力指標(biāo)，用于評(píng)價(jià)大鼠術(shù)后各組的神經(jīng)功能。利用免疫熒光雙標(biāo)技術(shù)于缺血后21天檢測(cè)BrdU+/Lamin+細(xì)胞，缺血后35天檢測(cè)BrdU+/NeuN+以及BrdU+/GFAP+細(xì)胞。缺血后35天尼氏小體染色檢測(cè)缺血核心區(qū)面積。Western Blot檢測(cè)缺血后21天DCX、VEGF、SDF-1α/CXCR4，缺血后35天GAP-43/SYN、NGF/NT3/BDNF、Wnt3a/p-β-cat

5、enin/β-catenin、p-CREB/t-CREB蛋白表達(dá)的變化。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
　　1.OEA抑制了LPS誘導(dǎo)的THP-1細(xì)胞中NF-κB的激活、ERK1/2和STAT3的磷酸化以及AP-1的表達(dá)。在加入ERK1/2阻斷劑后，OEA對(duì)ERK1/2以及STAT3磷酸化的抑制作用減弱，同時(shí)對(duì)AP-1以及IL-6表達(dá)的抑制作用也降低。
　　2.OEA可以在缺血后不同時(shí)間點(diǎn)明顯改善大鼠腦缺血后的運(yùn)動(dòng)功能，并且可以增加

6、缺血半暗帶新生神經(jīng)元以及新生血管細(xì)胞的數(shù)量，提高VEGF/SDF-1 a/CXCR4、 DCX、 GAP-43/SYN、 BDNF/NGF/NT3、Wnt3 a/p-β-catenin/β-catenin以及p-CREB/t-CREB的表達(dá)。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)論:
　　1.在LPS誘導(dǎo)的THP-1細(xì)胞中，OEA是通過(guò)抑制TLR4下游的NF-κB以及ERK1/2/AP-1/STAT3信號(hào)通路發(fā)揮抗炎作用。
　　2.OEA可以通