硫化氫對(duì)大鼠腸缺血再灌注后回腸收縮活性和腸神經(jīng)的保護(hù)作用.pdf

1、研究目的：腸缺血再灌注（ischemia-reperfusion，I/R）損傷可在出血性休克、小腸移植、機(jī)械性梗阻和嚴(yán)重外傷等過程中發(fā)生，可引起小腸收縮活力降低、微血管通透性升高和腸黏膜屏障功能下降，并可引起腸道細(xì)菌移位進(jìn)而導(dǎo)致多臟器功能衰竭綜合征。腸缺血再灌注可通過引起腸神經(jīng)元、平滑肌細(xì)胞、CajAl間質(zhì)細(xì)胞（interstitiAlcells of Cajal,ICC）的凋亡而引起小腸運(yùn)動(dòng)功能障礙，尤其是腸神經(jīng)系統(tǒng)（enteric

2、nervous system，ENS）中膽堿能腸神經(jīng)受損從而引起興奮性神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿（acetylcholine，Ach）減少是最重要的原因之一。盡管腸缺血再灌注在臨床中較為常見且可引起嚴(yán)重的并發(fā)癥和死亡率，但是仍缺乏有效的治療藥物。硫化氫（hydrogen sulfide，H2S）是一種內(nèi)源性氣體信號(hào)分子，在哺乳動(dòng)物體內(nèi)發(fā)揮著許多重要的生理功能。近來，許多學(xué)者證實(shí)其可在多種臟器如心、肺、肝、腎、腸缺血再灌注模型中起到保護(hù)作用。但這些

3、實(shí)驗(yàn)多數(shù)都是在缺血前預(yù)防性的給予硫化氫，尚未有實(shí)驗(yàn)證實(shí)硫化氫能否在缺血之后起到保護(hù)腸神經(jīng)及腸運(yùn)動(dòng)功能的作用。本課題旨在研究在缺血之后再灌注之前給予硫化氫是否有保護(hù)腸收縮活性和腸神經(jīng)元的作用及相關(guān)機(jī)制。
　　 研究方法：24只雄性SD大鼠隨機(jī)分為4組（每組6只）：正常組（A），假手術(shù)組（B），腸缺血再灌注組（C），腸缺血再灌注加硫化氫干預(yù)組（D）。C組和D組大鼠通過夾閉腸系膜上動(dòng)脈1h后松開血管夾再灌注4h 來建立腸缺血再灌注模型

4、；硫化氫的供體NaHS （10μmol/kg）于再灌注前20min 腹腔內(nèi)注射；B組大鼠僅行開腹后翻動(dòng)腸道而未夾閉動(dòng)脈。功能學(xué)實(shí)驗(yàn)通過離體器官恒溫浴慒灌流技術(shù)記錄離體回腸肌條自發(fā)收縮和對(duì)氯化鉀（KCl；30mmol/L）、乙酰膽堿（Ach；10-5mol/L）、電場(chǎng)刺激（electricAlfieldstimulation，EFS；30V，10Hz，1.00ms，10s）的反應(yīng)。形態(tài)學(xué)實(shí)驗(yàn)通過免疫熒光檢測(cè)腸肌間神經(jīng)叢（myenteric

5、 plexus，MP）中Hu蛋白、膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶（cholineacetyltransferase，ChAT）受體陽性神經(jīng)元表達(dá)的變化。
　　 結(jié)果：1、與正常組相比，假手術(shù)組離體肌條自發(fā)收縮頻率、曲線下面積、對(duì)KCl、Ach和 EFS的反應(yīng)、Hu蛋白和ChAT 受體陽性神經(jīng)元表達(dá)均無明顯改變。2、與假手術(shù)組相比，缺血再灌注組大鼠離體肌條自發(fā)收縮頻率、對(duì)KCl和Ach的反應(yīng)無明顯改變；離體肌條自發(fā)收縮曲線下面積降低（p<0.05

6、），對(duì)EFS的反應(yīng)明顯下降（p<0.05）；在免疫熒光中，Hu蛋白、ChAT 受體陽性神經(jīng)元表達(dá)均明顯降低（p<0.05）。3、與缺血再灌注組相比，硫化氫干預(yù)組大鼠離體肌條自發(fā)收縮頻率、對(duì)KCl和Ach的反應(yīng)無明顯改變；離體肌條自發(fā)收縮曲線下面積升高（p<0.05），對(duì)EFS的反應(yīng)升高（p<0.05）；在免疫熒光中，Hu蛋白、ChAT 受體陽性神經(jīng)元表達(dá)均明顯升高（p<0.05）。
　　 結(jié)論：1、腸缺血再灌注（I1h/R4h）