谷氨酰胺對(duì)大鼠腸缺血再灌注后肺損傷的影響.pdf

1、目的：探討谷氨酰胺對(duì)大鼠腸缺血再灌注(Ⅱ/R)后肺損傷的影響，從腸缺血再灌注后炎癥調(diào)控以及腸黏膜屏障等角度探討其可能的機(jī)制，為臨床圍術(shù)期營(yíng)養(yǎng)治療提供理論依據(jù)。 方法：1.健康雄性SD大鼠45只，隨機(jī)分組并分為兩部分，均采用免疫印跡方法，分別觀察不同劑量谷氨酰胺對(duì)正常大鼠肺臟HSP-70表達(dá)的影響，以及谷氨酰胺對(duì)HSP-70表達(dá)是否具有時(shí)程效應(yīng)。2.選擇健康雄性SD大鼠25只，隨機(jī)分為假手術(shù)組、對(duì)照組以及谷氨酰胺0.15、0.45

2、、0.75g/kg組，采用大鼠腸缺血再灌注模型，在模型建立前預(yù)先靜脈給予谷氨酰胺，腸缺血60min再灌注90min后，光鏡和電鏡下觀察大鼠腸缺血再灌注后肺臟和小腸組織形態(tài)學(xué)變化，通過(guò)生化方法測(cè)定丙二醛(MDA)、髓過(guò)氧化物酶(MPO)、伊文氏蘭含量的變化；采用免疫組織化學(xué)、免疫印跡以及realtimePCR方法觀察谷氨酰胺對(duì)HSP-70、ICAM-1、TNF-α表達(dá)的影響。3.在對(duì)其機(jī)制的進(jìn)一步研究中，25只健康雄性SD大鼠隨機(jī)分為假手

3、術(shù)組、對(duì)照組、槲皮素組、谷氨酰胺組以及槲皮素+谷氨酰胺組(Sham、Con、Q、Gln、Q+G)，通過(guò)腹腔注射HSP-70的抑制劑槲皮素，免疫印跡法觀察大鼠腸缺血再灌注后HSP-70、NF-κB在肺臟中的表達(dá)變化，并結(jié)合肺臟組織形態(tài)學(xué)以及MDA、MPO、ICAM-1的變化，觀察HSP-70、NF-κB與谷氨酰胺的作用關(guān)系；利用TUNEL法觀察谷氨酰胺對(duì)腸黏膜上皮凋亡的影響并測(cè)定小腸黏膜谷胱甘肽的含量，探討谷氨酰胺對(duì)腸缺血再灌注后肺保護(hù)作

4、用的腸道機(jī)制。 結(jié)果：1.谷氨酰胺可以劑量依賴(lài)性增強(qiáng)HSP-70在大鼠肺臟的表達(dá)，并具有時(shí)程效應(yīng)。大鼠腸缺血再灌注后肺損傷評(píng)分顯著增高，肺組織MDA、MPO以及伊文氏藍(lán)滲出量明顯增加，同假手術(shù)組相比，差異具有顯著意義，P＜0.01；谷氨酰胺組大鼠Ⅱ/R后肺臟MDA、MPO以及伊文氏藍(lán)滲出量明顯低于對(duì)照組，同時(shí)ICAM-1、TNF-α基因表達(dá)降低，同對(duì)照組相比，差異具有顯著意義。大鼠II/R后小腸損傷評(píng)分以及伊文氏藍(lán)滲出量增高，同

5、對(duì)照組相比，谷氨酰胺組大鼠小腸損傷評(píng)分降低，伊文氏藍(lán)滲出減少，尤以谷氨酰胺0.75g/kg組最為明顯，P＜0.01。2.大鼠腹腔注射槲皮素后，肺臟中MDA、MPO水平與對(duì)照組相比，差異無(wú)顯著意義，P＞0.05；谷氨酰胺組大鼠HSP-70表達(dá)明顯增加，同Q組以及G+Q組相比，差異具有顯著意義，P＜0.05；谷氨酰胺組大鼠肺臟NF-κB表達(dá)以及MDA、MPO水平明顯低于Q組以及G+Q組。對(duì)照組大鼠腸缺血再灌注后腸黏膜細(xì)胞凋亡增加，谷胱甘肽含

6、量降低，同谷氨酰胺組相比，差異具有顯著意義，P＜0.01。 結(jié)論：1.大鼠腸缺血再灌注后肺組織ICAM-1、TNF-α表達(dá)增高，促進(jìn)了中性粒細(xì)胞在肺內(nèi)的積聚，是腸缺血再灌注后肺損傷的重要原因之一。2.谷氨酰胺能夠劑量依賴(lài)性增強(qiáng)熱休克蛋白-70表達(dá)，并具有時(shí)程效應(yīng)；預(yù)先應(yīng)用谷氨酰胺可以降低ICAM-1、TNF-α表達(dá)，減少大鼠腸缺血再灌注后肺臟損傷；誘導(dǎo)熱休克蛋白-70表達(dá)進(jìn)而抑制NF-κB的過(guò)度產(chǎn)生，可能是其肺保護(hù)作用的機(jī)制之一