谷氨酰胺對大鼠腸缺血再灌注損傷的作用及機(jī)制.pdf

1、目的：探討谷氨酰胺對腸缺血再灌注損傷大鼠腸粘膜形態(tài)病理學(xué)的保護(hù)作用以及分子機(jī)制，并觀察不同的給藥方法、不同給藥時間對谷氨酰胺作用的影響。
　　方法：1.用手術(shù)的方法構(gòu)建大鼠腸缺血再灌注損傷模型。
　　2.酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測大鼠血標(biāo)本中TNF-α含量的變化。
　　3.腸標(biāo)本的石蠟包埋、切片、以及H&E染色，觀察谷氨酰胺對大鼠腸缺血再灌注損傷形態(tài)學(xué)的影響。
　　4.用RT-PCR和Western-bl

2、ot的方法檢測腸缺血再灌注損傷的各組大鼠腸標(biāo)本組織中NF-κB和PPAR-γ基因的mRNA和蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果：1.腸缺血大鼠模型：正常喂養(yǎng)組（NG組）、給予尾靜脈注射谷氨酰胺組(GIG組)、給予谷氨酰胺灌胃組(GOG組)、術(shù)中腸系膜上靜脈給予谷氨酰胺組（GIOG組）、術(shù)中腸腔給予谷氨酰胺組（GIEC組）,模型構(gòu)建成功。
　　2.用ELISA的方法分別檢測五組大鼠(NG、GIG、GOG、GIOG、GIEC)血清中TNF

3、-α的含量，發(fā)現(xiàn)1個小時、12個小時NG、GIEC組大鼠血清中TNF-α含量明顯高于GIG、GOG組（P＜0.05），同時也比GIOG組含量高。
　　3.用H&E染色的方法，觀察了谷氨酰胺對大鼠腸粘膜缺血再灌注損傷形態(tài)學(xué)的影響。結(jié)果顯示NG、GIEC組大鼠在1小時和12小時腸粘膜的形態(tài)損傷非常嚴(yán)重。而GOG、GIG組大鼠1小時和12小時腸粘膜的損傷程度比NG、GIEC組輕。GIOG組大鼠1小時和12小時腸粘膜的損傷程度比GOG、G

4、IG嚴(yán)重。
　　4.使用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)（RT-PCR）和蛋白免疫印跡技術(shù)（Western-blot），去評估各組(NG、GIG、GOG、GIOG、GIEC)大鼠腸粘膜標(biāo)本中NF-κB和PPAR-γ基因的mRNA和蛋白表達(dá)情況。NG、GIEC組NF-κB和PPAR-γ基因的mRNA和蛋白表達(dá)量最高，兩組之間并沒有差異（P＞0.05）；GIG、GOG組NF-κB和PPAR-γ基因的mRNA和蛋白表達(dá)量最低，與NG、GIEC組N

5、F-κB和PPAR-γ基因的mRNA和蛋白表達(dá)量有顯著的差異（P＜0.05）。
　　結(jié)論：1.對于腸缺血再灌注損傷的大鼠模型，提前4天預(yù)給予谷氨酰胺，不管是靜脈注射組，還是口服組，谷氨酰胺都能夠?qū)Υ笫蟮哪c粘膜起到保護(hù)作用，能夠降低血清TNF-α水平；而在腸缺血時給藥，因為靜脈注射使細(xì)胞內(nèi)很快能夠得到豐富的谷氨酰胺，所以能夠起到一定的保護(hù)作用，但是腸腔內(nèi)給藥，因為缺血再灌注損傷的存在并不能吸收，所以未對腸粘膜起到保護(hù)作用，也不能降低