作為新型肝癌靶向載體的雙配體殼聚糖納米顆粒的體內(nèi)分布和生物相容性.pdf

1、目的：明確經(jīng)甘草次酸修飾的半乳糖化殼聚糖納米顆粒（GCGA NPs）在生物體內(nèi)的分布及其對(duì)肝癌（HCC）細(xì)胞的靶向效率，進(jìn)一步評(píng)估該納米顆粒的細(xì)胞毒性和生物相容性。
　　方法：遵循先前報(bào)道的兩步酰胺化反應(yīng)合成GACS NPs和GCGA NPs，并通過(guò)化學(xué)反應(yīng)修飾異硫氰酸熒光素（FITC）。采用場(chǎng)發(fā)射掃描電子顯微鏡（FE-SEM）來(lái)觀測(cè)納米顆粒的形態(tài)和大小，用Zetasizer3000HS儀器系統(tǒng)測(cè)量其粒徑。通過(guò)設(shè)置體外細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)

2、，在共聚焦激光掃描顯微鏡（CLSM）下觀察比較三種納米顆粒（GCGA、GACS、CS NPs）對(duì)HepG2細(xì)胞的靶向能力以及GCGA NPs對(duì)HepG2細(xì)胞和人正常肝細(xì)胞LO2的親和力。以CCK-8法來(lái)測(cè)試不同濃度的GCGA NPs對(duì)HepG2的細(xì)胞毒性。用體外溶血試驗(yàn)評(píng)估納米顆粒的血液相容性。采用肝臟隧道嵌入法構(gòu)建H22細(xì)胞小鼠原位肝癌模型，用FITC標(biāo)記的熒光納米顆粒溶液經(jīng)尾靜脈注射小鼠，以追蹤不同時(shí)間點(diǎn)該納米載體在生物體內(nèi)的分布，

3、進(jìn)一步驗(yàn)證其對(duì)高表達(dá)甘草次酸（GA）和乳糖醛酸（LA）受體的肝癌組織的高靶向性。通過(guò)檢測(cè)經(jīng)GCGA NPs處理過(guò)的SD大鼠的體重、血常規(guī)和血生化指標(biāo)，并鏡下觀察其主要器官的HE染色標(biāo)本，來(lái)評(píng)估該納米顆粒的生物相容性。
　　結(jié)果：參考已報(bào)道的合成方法成功制備出GCGA、GACS、CS NPs，并標(biāo)記了FITC。FE-SEM圖片顯示三者均呈球形，單分散性，大小均一，平均粒徑約為60nm。動(dòng)態(tài)光散射（DLS）檢測(cè)其平均粒徑分別為93.8

4、nm、90.3nm和94.0nm。在相同條件下，來(lái)自GCGA NPs共聚焦圖片熒光強(qiáng)度比其他兩種納米顆粒更強(qiáng)，并且HepG2細(xì)胞內(nèi)的綠色熒光相較于缺乏靶向受體的LO2細(xì)胞也有顯著的增強(qiáng)。細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)表明GCGA NPs在濃度低于50ug/mL時(shí)對(duì)HepG2的無(wú)明顯的細(xì)胞毒性。這種納米顆粒即使在最高濃度（300ug/mL）下孵育紅細(xì)胞3h也沒(méi)有呈現(xiàn)出明顯的溶血現(xiàn)象，經(jīng)t檢驗(yàn)分析可知上清液的光密度值（OD值）與對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0