殼聚糖及其衍生物作為基因載體的生物安全性評(píng)價(jià).pdf

1、自上世紀(jì)90年代初起，納米科技得到了迅速發(fā)展，已廣泛應(yīng)用于電子、信息、半導(dǎo)體、生物和醫(yī)藥等領(lǐng)域。越來(lái)越多的國(guó)家開始增加在該領(lǐng)域研究的投資，以期在這個(gè)孕育著巨大商機(jī)的領(lǐng)域中奪得先機(jī)。 然而隨著研究的深入和發(fā)展，納米材料的生物安全性問(wèn)題引起越來(lái)越多的關(guān)注，已有的一些研究證據(jù)也表明某些納米材料對(duì)人類的健康的確存在潛在的危害。為保證納米科技的健康發(fā)展，進(jìn)行納米技術(shù)的生物安全性評(píng)估及研究已迫在眉睫。 本實(shí)驗(yàn)室近年來(lái)一直致力于殼聚糖

2、及其衍生物作為基因運(yùn)載體系的研究，在本實(shí)驗(yàn)室前期工作基礎(chǔ)上，本研究選用殼聚糖、精氨酸修飾的殼聚糖基因和烷基化修飾的殼聚糖作為載體制備基因納米粒子，并就其對(duì)巨噬細(xì)胞功能的影響進(jìn)行了初步研究。研究?jī)?nèi)容主要分為三個(gè)部分： 1．制備祛除內(nèi)毒素的質(zhì)粒DNA，殼聚糖及其上述兩種衍生物與DNA按照N/P比4：1的比例采用復(fù)凝乳方法制備納米粒子；采用透射電鏡，原子力顯微鏡和動(dòng)態(tài)光散射的方法進(jìn)行表征和觀察。 2．將上述三種材料與DNA形成

3、的納米粒子分別以0.1，1，10，20μg/ml的濃度(以DNA的含量為標(biāo)準(zhǔn))與小鼠巨噬細(xì)胞系RAW264.7細(xì)胞共孵育，在1 h，6h，24 h后檢測(cè)細(xì)胞上清中細(xì)胞因子IL-1B、IL-6、IL-10、IL-12和TNF-α的濃度，以觀測(cè)納米粒子是否刺激RAW264.7細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的增加。結(jié)果顯示納米粒子在上述濃度時(shí)，24小時(shí)之內(nèi)細(xì)胞因子的分泌與陰性對(duì)照相比并無(wú)顯著差別。 3．將1 ml 50μg/ml的殼聚糖及其修飾物與