消退素D1對(duì)非壓迫性腰椎間盤突出癥模型大鼠根性神經(jīng)痛的作用研究.pdf

1、背景：
　　腰椎間盤突出癥患者是腰腿痛患者的主要來(lái)源之一，該病所致的腰痛和神經(jīng)根性痛是患者最主要的痛苦，極大地影響了患者的生活質(zhì)量。腰椎間盤突出癥所致的腰痛和神經(jīng)根性痛發(fā)病的多源性也越來(lái)越受到人們的重視，除了機(jī)械壓迫外，化學(xué)物質(zhì)刺激，神經(jīng)系統(tǒng)的炎性反應(yīng)與免疫反應(yīng)，以及疼痛感受器致敏等均參與了腰痛及神經(jīng)根性痛的發(fā)生。髓核作為一種正常的間盤組織存在于機(jī)體內(nèi)，一旦纖維環(huán)破裂，髓核突出暴露于機(jī)體的免疫系統(tǒng)，將會(huì)激發(fā)神經(jīng)系統(tǒng)強(qiáng)烈的自身免疫反

2、應(yīng)和炎癥改變，引起白細(xì)胞的活化和滲透、炎癥細(xì)胞因子釋放以及神經(jīng)細(xì)胞變性，最終導(dǎo)致脊髓傷害感受性神經(jīng)元的激活，引起神經(jīng)病理性疼痛。
　　消退素(resolvin)是一種由ω-3多不飽和脂肪酸衍生的新型促炎癥消退介質(zhì)。具有阻礙白細(xì)胞浸潤(rùn)、下調(diào)炎癥介質(zhì)、促進(jìn)凋亡的中性粒細(xì)胞及細(xì)胞碎片的吞噬攝取等功效，在炎癥早期促進(jìn)炎癥的及時(shí)消退。目前大量研究已經(jīng)證實(shí)，消退素在多種炎性疾病如:哮喘、膿毒癥、牙周病及視網(wǎng)膜病變等，顯示出了良好的抗炎促消退作

3、用。此外，新近研究還發(fā)現(xiàn)，消退素對(duì)于一些炎性和神經(jīng)病理性疼痛的模型大鼠也發(fā)揮了顯著的鎮(zhèn)痛效應(yīng)。然而消退素在腰椎間盤突出所致的大鼠根性神經(jīng)痛模型中的作用，卻鮮有報(bào)道。本研究在建立非壓迫性腰椎間盤突出癥模型大鼠的基礎(chǔ)上，探討消退素D1(Resolvin D1，RvD1)對(duì)根性神經(jīng)痛的作用及內(nèi)在機(jī)制。
　　目的：
　　本研究通過(guò)建立非壓迫性腰椎間盤突出癥模型大鼠，采用鞘內(nèi)給藥的方式，探討RvD1對(duì)大鼠疼痛反應(yīng)及神經(jīng)根炎癥的作用及內(nèi)

4、在機(jī)制。
　　方法：
　　1.將152只大鼠按隨機(jī)數(shù)字法平均分成4組:假手術(shù)組（假手術(shù)+10μl PBS）、模型組（模型+10μl PBS）、RvD110ng組（模型+10μl RvD110 ng）、RvD1100ng組(模型+10μl RvD1100 ng)，每組38只。建立非壓迫性腰椎間盤突出癥大鼠模型，于術(shù)后連續(xù)3天鞘內(nèi)注射RvD1或PBS10μl。
　　2.術(shù)前1d及術(shù)后第1、2、3、4、7、10、21d觀察并

5、記錄各組大鼠術(shù)側(cè)50％縮足閾值(paw withdrawal threshold， PWT)。術(shù)后第7d，取各組大鼠術(shù)側(cè)脊髓背角(L4-L6)及L5背根神經(jīng)節(jié)(dorsal root ganglion，DRG)，通過(guò)RT-PCR(real-timepolymerase chain reaction)和ELISA(enzyme-linked immune sorbent assay)技術(shù)測(cè)定各組大鼠脊髓背角中炎性因子TNF-α(tumor

6、 necrosis factor-α)、IL-1β(interleukin-1β)、IL-10(interleukin-10)和TGF-β1(Transforming growth factor-β1)mRNA及蛋白的含量;應(yīng)用ELISA技術(shù)檢測(cè)L5 DRG中炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-10和TGF-β1蛋白的含量。此外，利用Western blot技術(shù)檢測(cè)各組大鼠術(shù)側(cè)脊髓背角中NF-κB/p65(Nuclear factor

7、-κB/p65)和ERK(Extracellular signal-regulatedkinase，p-ERK、t-ERK)通路蛋白的表達(dá)量;應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測(cè)術(shù)側(cè)脊髓背角及L5 DRG中NF-κB/p65和p-ERK陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)量。
　　結(jié)果：
　　術(shù)前1d至術(shù)后21d的觀察期內(nèi)，術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)模型組大鼠50％PWT較假手術(shù)組明顯降低;鞘內(nèi)注射消退素RvD1(10ng or100ng)能明顯升高大鼠術(shù)側(cè)50％PWT。非壓迫

8、模型建模后第7d，模型組大鼠脊髓背角和DRG中TNF-α和IL-1β的表達(dá)較假手術(shù)組明顯升高，IL-10和TGF-β1的表達(dá)較假手術(shù)組明顯降低;鞘內(nèi)給予RvD1(10ng or100ng)能明顯降低大鼠脊髓背角及DRG中的TNF-α和IL-1β水平，升高IL-10和TGF-β1的表達(dá)水平，且呈劑量依賴性。非壓迫模型建模后第7d，模型組大鼠脊髓背角中NF-κB/p65、p-ERK蛋白水平較假手術(shù)組明顯升高，脊髓背角及DRG中NF-κB/p

9、65及p-ERK陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)量明顯升高;鞘內(nèi)注射RvD1(10ng or100ng)后，大鼠脊髓背角NF-κB/p65、p-ERK蛋白水平明顯降低，脊髓背角及DRG中NF-κB/p65、p-ERK陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)量明顯減少，且呈劑量依賴性。
　　結(jié)論：
　　鞘內(nèi)給予消退素RvD1后，非壓迫性腰椎間盤突出癥模型大鼠的根性神經(jīng)痛明顯減輕，脊髓背角及DRG中促炎因子(TNF-α和IL-1β)明顯減少、抗炎因子(TGF-β1和IL-10