蘆丁預(yù)處理對(duì)TMT致學(xué)習(xí)記憶功能障礙的保護(hù)作用與單胺類神經(jīng)遞質(zhì)及其代謝的關(guān)系.pdf

1、目的:三甲基氯化錫(TMT)是生產(chǎn)有機(jī)錫穩(wěn)定劑過程中產(chǎn)生的一種劇毒產(chǎn)物，被廣泛應(yīng)用于殺蟲劑、油漆、橡膠、PVC塑料的生產(chǎn)中。目前，有關(guān)TMT的急性中毒事件不斷被報(bào)道，其對(duì)生產(chǎn)和人身安全造成的危害不可忽視。研究表明TMT的毒性以中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷為主，而學(xué)習(xí)記憶功能障礙是中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷的重要表現(xiàn)。國(guó)內(nèi)外關(guān)于TMT的具體毒性作用研究不多，且具體的毒作用機(jī)制尚無定論。本研究擬通過確定的TMT暴露劑量建立BALB/c小鼠急性中毒模型，來研究TM

2、T急性暴露對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶功能的影響以及小鼠腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的變化情況，探討TMT導(dǎo)致小鼠學(xué)習(xí)記憶功能損傷與單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的相關(guān)性及可能機(jī)制。
　　方法:①SPF級(jí)8周健康雄性BALB/c小鼠，隨機(jī)分為對(duì)照組和TMT暴露組，TMT暴露組又分成2.00 mg/kg，2.25 mg/kg，2.50 mg/kg，2.75 mg/kg和3.00mg/kg五個(gè)不同劑量組，每組6只小鼠。TMT暴露組小鼠腹腔注射TMT注射液;對(duì)照組小鼠腹腔注射

3、等量的生理鹽水。通過觀察小鼠的行為表現(xiàn)和Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)所得的逃逸潛伏期結(jié)果確定本實(shí)驗(yàn)中TMT的急性暴露劑量。②高效液相色譜-電化學(xué)法(HPLC-ECD)檢測(cè)不同時(shí)相點(diǎn)(0h，0.5h，1h，3h，6h，12h) TMT暴露BALB/c小鼠皮層和海馬中七種單胺類神經(jīng)遞質(zhì)(E，NE，DA， DOPAC，HAV，5-HT，5-HIAA)的水平。③根據(jù)①中所得的結(jié)果將雄性BALB/c小鼠隨機(jī)分成對(duì)照組、TMT暴露組、Rutin組、TMT

4、+Rutin組，每組6只。Rutin組小鼠給予10mg/kg Rutin處理一周;TMT暴露組小鼠前六天腹腔注射生理鹽水，第七天注射TMT; TMT+Rutin組前6天Rutin處理，最后一次腹腔注射TMT;對(duì)照組小鼠給予等量的生理鹽水處理一周。TMT暴露24h后觀察各組小鼠的行為表現(xiàn)并做水迷宮實(shí)驗(yàn)，記錄小鼠逃逸潛伏期的改變情況。④HPLC-ECD法檢測(cè)各組小鼠海馬和皮層中七種單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的水平。探討Rutin預(yù)處理后對(duì)小鼠行為的改變

5、及對(duì)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的影響。
　　結(jié)果:①BALB/c小鼠腹腔注射不同劑量TMT24h后，對(duì)照組和低劑量TMT暴露組(2.0mg/kg、2.25 mg/kg)小鼠行為正常;中劑量TMT暴露組（2.50 mg/kg、2.75 mg/kg）的小鼠出現(xiàn)震顫現(xiàn)象，進(jìn)食和飲水均減少，部分小鼠尾部有咬傷;3.00 mg/kg TMT暴露組小鼠表現(xiàn)極其異常，活動(dòng)量減少，有明顯震顫，且尾部有咬傷。Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)顯示:對(duì)照組和2.00 mg/

6、kg TMT暴露組的小鼠隨著訓(xùn)練次數(shù)的增加，其找到隱藏平臺(tái)的時(shí)間（逃逸潛伏期）越來越短，但兩組之間無顯著性差異(P＞0.05);2.25mg/kg TMT暴露組的小鼠第四次訓(xùn)練與對(duì)照組相比逃逸潛伏期明顯增加，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);2.50mg/kgTMT暴露組和2.27mg/kg TMT暴露組小鼠在第三次訓(xùn)練起，其逃逸潛伏期與對(duì)照組相比均顯著延長(zhǎng)(P＜0.05)，但兩次間并無顯著性差異(P＞0.05);因3.00mg/k

7、gTMT暴露組小鼠完全喪失游泳能力，故無該組Morris水迷宮數(shù)據(jù)。
　　②TMT暴露不同時(shí)相點(diǎn)，其小鼠海馬和皮層中的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)水平發(fā)生改變。與對(duì)照組相比，海馬區(qū)單胺類神經(jīng)遞質(zhì):NE水平在1h前的水平較對(duì)照組升高(P＜0.05)，后降至正常水平;E含量無明顯變化;DA含量在暴露0.5h后即出現(xiàn)明顯下降(P＜0.05); DOPAC、HAV水平均在暴露3h后顯著上升(P＜0.05);5-HT、5-HIAA含量均在暴露0.5h后減

8、少(P＜0.05)。小鼠皮質(zhì)中各單胺類神經(jīng)遞質(zhì)與對(duì)照組相比:NE水平在暴露1h后升高(P＜0.05);在暴露12hE含量降低(P＜0.05);DA水平在暴露3h后降低(P＜0.05); DOPAC、HAV水平在個(gè)各時(shí)相點(diǎn)均無顯著改變;5-HT、5-HIAA含量均在暴露0.5h后減少(P＜0.05)。
　?、厶J丁預(yù)處理后行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)，除TMT暴露組外的實(shí)驗(yàn)組小鼠其逃逸港伏期均明顯縮短(P＜0.05); TMT暴露組小鼠從

9、第4次訓(xùn)練開始逃逸潛伏期較對(duì)照組顯著延長(zhǎng)(P＜0.05); Rutin+TMT組小鼠的逃逸潛伏期與對(duì)照組比較從第5次訓(xùn)練起明顯縮短(P＜0.05); Rutin組小鼠的逃逸潛伏期較其他組小鼠縮短，從第3次訓(xùn)練開始，較TMT暴露組顯著減少(P＜0.05);每次訓(xùn)練Rutin組小鼠的逃逸潛伏期與同期的對(duì)照組小鼠相比均縮短，但無顯著性差異(P＞0.05)。
　?、躎MT暴露24h后小鼠海馬區(qū)的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量與對(duì)照組相比:NE含量無明

10、顯變化;除HAV水平升高外其他單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的含量均降低(P＞0.05)。TMT暴露24h后小鼠皮質(zhì)區(qū)的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)水平與對(duì)照組相比:E，DA，DOPAC，5-HT,5-HIAA水平均出現(xiàn)下降趨勢(shì);NE，HAV含量無顯著性改變。Rutin組小鼠皮質(zhì)區(qū)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)與對(duì)照組相比無明顯改變，海馬區(qū)NE，DA，DOPAC水平較對(duì)照組上升，5-HT,5-HIAA含量較對(duì)照組下降，E，HAV水平與對(duì)照組無顯著性差別。Rutin預(yù)處理一周TMT暴

11、露24h后的小鼠與TMT暴露組小鼠相比:海馬區(qū)DA，DOPAC，5-HT，5-HIAA含量均出現(xiàn)不同程度的上升，HAV水平降低，NE，E無顯著性改變;皮層中NE，DA，5-HT，5-HIAA水平均升高，E，DOPAC，HAV含量并未出現(xiàn)明顯變化。
　　結(jié)論:①確定TMT急性暴露的劑量為2.25mg/kg，暴露24h后可導(dǎo)致BALB/c小鼠學(xué)習(xí)記憶功能障礙。②TMT急性暴露后對(duì)小鼠海馬和皮層中E水平無明顯改變，但對(duì)NE水平有上調(diào)作用