突觸相關(guān)蛋白GAP-43及SYP在TMT致小鼠學(xué)習(xí)記憶功能障礙中的作用研究.pdf

1、目的：隨著有機(jī)錫成為無鉛穩(wěn)定劑的替代品得到普遍應(yīng)用以來,合成有機(jī)錫過程中伴隨的雜質(zhì)TMT也廣泛存在于人們生產(chǎn)和生活中;由TMT引起的急性中毒事件屢見不鮮,其造成的危害也越來越嚴(yán)重。既往研究表明TMT可導(dǎo)致人體多個(gè)組織器官和系統(tǒng)的損害,其中以中樞神經(jīng)系統(tǒng)的損傷尤為突出,與之伴隨的中樞神經(jīng)癥狀表現(xiàn)最為常見;國(guó)內(nèi)外多數(shù)研究集中于神經(jīng)系統(tǒng),學(xué)習(xí)記憶功能變化是其研究的重要內(nèi)容之一,而關(guān)于TMT具體作用的研究甚少,并且其具體作用機(jī)制尚未明了。本研究

2、擬通過TMT劑量的探討確定其暴露的實(shí)驗(yàn)劑量并建立急性中毒模型,從行為學(xué)、組織學(xué)、分子生物學(xué)不同水平研究TMT對(duì)小鼠的神經(jīng)毒性效應(yīng)及突觸相關(guān)蛋白的變化,并探討給予相關(guān)保護(hù)劑后突觸相關(guān)蛋白的變化情況,從多個(gè)方面探討TMT致小鼠學(xué)習(xí)記憶功能障礙與突觸相關(guān)蛋白改變的相關(guān)性及可能的機(jī)制,為深入理解和預(yù)測(cè)神經(jīng)毒物對(duì)生物體的危害及尋找有效對(duì)策。
　　 方法：①將6～9周齡雄性Balb/c小鼠分為生理鹽水組(即對(duì)照組)和TMT不同劑量組(2.0

3、0,2.25,2.50,2.75,3.00mg.kg-1),均以腹腔注射的方式給藥,以Morris水迷宮和組織切片HE染色的結(jié)果確定實(shí)驗(yàn)用TMT劑量,并以此劑量建立TMT急性暴露模型;②用westem檢測(cè)不同時(shí)相點(diǎn)(oh,1h,3h,6h,12h,24h)TMT作用Balb/c小鼠海馬和皮層GAP-43,SYP蛋白的表達(dá)情況;③將小鼠分為對(duì)照組、TMT組、TMT+Rutin組、Rutin組,后兩組Rutin(10mg.kg-1)均預(yù)處理

4、一周,TMT組前6天注射生理鹽水;各組最后一次注射24h后行Moms水迷宮,觀察小鼠逃逸潛伏期的變化;用western檢測(cè)各組海馬和皮層GAP-43,SYP蛋白表達(dá)情況;探討蘆丁預(yù)處理后TMT對(duì)小鼠行為學(xué)的影響,以及對(duì)突觸相關(guān)蛋白GAP-43、SYP表達(dá)變化,進(jìn)而研究蘆丁對(duì)TMT致小鼠學(xué)習(xí)記憶能力損傷中可能的保護(hù)作用。
　　 結(jié)果：①經(jīng)水迷宮實(shí)驗(yàn),對(duì)照組和TMT(2.00mg.kg-1)組隨著訓(xùn)練次數(shù)增加,其逃逸潛伏期均明顯縮短

5、,兩組逃逸潛伏期差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);TMT(2.25～2.75mg.kg-1)各組在四次訓(xùn)練中其逃逸潛伏期未見明顯縮短,第四次水迷宮訓(xùn)練時(shí) TMT(2.25mg.kg-1)組與生理鹽水組逃逸潛伏期相比顯著延長(zhǎng)(P＜0.05),從第三次水迷宮訓(xùn)練起TMT(2.50mg.kg-1和2.75mg.kg-1)組與生理鹽水組逃逸潛伏期相比均顯著延長(zhǎng)(P＜0.05);HE染色的結(jié)果顯示,TMT劑量為2.0mg.kg-1～3.00mg.

6、kg-1,在腹腔注射后24h可引起小鼠大腦皮層的神經(jīng)元壞死(細(xì)胞變小、變尖,核深染),且隨著劑量的增加其細(xì)胞壞死的程度加重;在其他腦區(qū)域(海馬、小腦等)也有不同程度的壞死。②從western的結(jié)果看,在各時(shí)相點(diǎn)TMT組(0～24h)與對(duì)照組的海馬和皮層腦區(qū)GAP-43蛋白表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);在TMT(24h)組與對(duì)照組的海馬腦區(qū)SYP蛋白表達(dá)相比顯著下調(diào)(P＜0.05),在TMT(6h～24h)組與對(duì)照組的皮層SYP蛋

7、白表達(dá)相比顯著下調(diào)(P＜0.05),并有逐漸減弱的趨勢(shì)。③經(jīng)水迷宮實(shí)驗(yàn),對(duì)照組、Rutin組、TMT＋Rutin組隨著訓(xùn)練次數(shù)的增加,其逃逸潛伏期均明顯縮短,TMT組在連續(xù)八次水迷宮訓(xùn)練中,小鼠的逃逸潛伏期未明顯縮短;從第四次水迷宮訓(xùn)練起TMT組與對(duì)照組逃逸潛伏期相比顯著延長(zhǎng)(p＜0.05),從第五次水迷宮訓(xùn)練起TMT組與TMT+Rutin組逃逸潛伏期相比顯著延長(zhǎng)(p＜0.05),從第三次水迷宮訓(xùn)練起TMT組與Rutin組逃逸潛伏期相比

8、顯著延長(zhǎng)(p＜0.05),從數(shù)值上看同一次訓(xùn)練中Rutin組比生理鹽水組的逃逸潛伏期要短,但兩者差異無統(tǒng)計(jì)意義(p＞0.05)。Western的結(jié)果顯示,TMT組與對(duì)照組、TMT＋Rutin組、Rutin組的海馬和皮層GAP-43蛋白表達(dá)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05),TMT組與對(duì)照組、Rutin組和TMT＋Rutin組的海馬和皮層SYP蛋白表達(dá)相比顯著下調(diào)(p＜0.05)。
　　 結(jié)論：①.TMT(2.25mg.kg-1)

9、急性暴露24h后可引起B(yǎng)alb/c小鼠逃逸潛伏期延長(zhǎng),提示TMT導(dǎo)致小鼠學(xué)習(xí)記憶功能障礙。②TMT作用小鼠后對(duì)海馬和皮層腦區(qū)的突觸相關(guān)蛋白GAP-43在0～24h內(nèi)表達(dá)未發(fā)現(xiàn)明顯變化,對(duì)海馬和皮層腦區(qū)SYP蛋白表達(dá)有下調(diào)作用,且皮層比海馬腦區(qū)SYP蛋白表達(dá)下調(diào)出現(xiàn)的時(shí)間更早。③蘆丁預(yù)處理小鼠一周,再TMT(2.25mg.kg-1)急性暴露24h后,小鼠的逃逸潛伏期未顯著延長(zhǎng),提示蘆丁對(duì)TMT致學(xué)習(xí)記憶能力的損害有保護(hù)效應(yīng)。④本實(shí)驗(yàn)條件下