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文檔簡介
1、華南理工大學碩士學位論文人免疫缺陷病毒Ⅰ型gp41核心結構域在釀酒酵母的表面展示姓名:葉波申請學位級別:碩士專業(yè):生物化工指導教師:林影20060501華南理工大學碩士學位論文ABSTRACTThehumanimmunodeficiencyvirus(HIV)istheetiologicagentsofacquiredimmunodeficiencysyn&omeinhumanwhichcalledAIDSHIVisanenvelope
2、dvirus。anditsenvelopeproteincomplexcontrolsthekeyprocessofviralentryThisenvelopeproteindeterminesviraltropismandfacilitatesthemembranefusionprocessthatallowsinvasionoftheviralgenomeTheenvelopeproteincallalsopromotethefus
3、ionofinfectedceilswithuninfectedneighboringcellsThetransmembraneglycoproteingp41isthecmcialmoleculartopromotethefusionofviralandcellularmembranesOwingtotheconservativeSttUCttⅡeofgp41anti倒1drugsmaybeavoiddrugresistancedev
4、elopmentSogp41couldbeanattractivetargetforthedevelopmentofantiviralagentsCrystallographicanalysishasdemonstratedthatthegp4Ifusionactivecoreadoptsasixstrandedhelicalbundle,inwhichthreeN—terminalpeptidesadoptahomotdmeriche
5、licalcoiledcoilformingthecenterofthebundleandthreeC—terminalpeptidehelicespackintohydrophobicgroovesOiltheoutersurfaceoftheNpeptidecoreinallantiparallelmannerformingaIrimerofhairpinsstructureThetrimerofhairpinslikelyrese
6、mblesthefusion—activeconformationsincethisstructuralmotifbringstheNterminalregionofgp41containingthefusionpeptidetogetherwiththeCterminalregionthatisanchoredtotheviralmembraneThisconformationrearrangementbringstheviralan
7、dtargetcellmembranestogetherandpromotesmembranefusionSoitprovidesimportantinformationfortheresearchofvaccineandanti—drugsofAIDSThegp41whichdisplayedinthispapercontainthesyntheticcorepolypeptideN51(L6)C46,whichlocatesHIV1
8、genomefrom7304bpto8338bpcontainingtheaa534toaa678ThispapermainlyexpatiatesontheconstructionoftheHIV1w41recombinantvectorsforyeastsurfacedisplayanddisplayinggp41onthesurfaceofSaccharomycescerevisiaeFirstlytagvectorswascon
9、structedAshortpeptidetug:FLAGor6xH/SwasseparatelyfusedtotheendofmultiplecloningsitesofvectorpICASusingPeRproductAfteridentifedandsequencedtagvectorspICASFLAG,pICAS一6HISwereobtainedNextrecombinantdisplayvectorsofgp41wasco
10、nstructedgp41WasamplifiedusingpMDl8Tgp41plasmid,containingtheHIV1gp41astemplateTherecombinantdisplayvectorspICAS6HISgp41andplCASFLAGgp41wereconstructedbycloningorientationallygp41intopICASFLAGandpICAS一6HISvectorsThenthel
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