淫羊藿素和HIV gp41融合多肽對T細胞亞群的影響.pdf

1、研究背景：
　　 艾滋病作為當今世界影響重大的流行性疾病,也是當前人類健康面臨重大威脅的疾病。但是,一直以來缺乏有效的治療藥物和疫苗。人類免疫缺陷病毒為 Ⅰ型包膜病毒,采用病毒宿主細胞膜融合機制。病毒表面糖蛋白結(jié)合到宿主細胞受體后,啟動病毒融合蛋白的一系列構(gòu)象變化。包膜病毒進入靶細胞的過程需要病毒膜糖蛋白的介導,這一類型病毒的包膜蛋白一般都包括兩個亞基,不跨膜的亞基(如HIV的gp120)能夠與靶細胞膜上病毒受體相結(jié)合,跨膜的亞

2、基(如HIV的gp41)介導病毒膜與靶細胞膜進行融合。因此可以據(jù)此來設計抑制劑,阻止包膜糖蛋白的進一步折疊,抑制病毒的入侵,為病毒性疾病的預防和治療提供新的思路和策略。
　　 HIV是一種感染人類免疫系統(tǒng)細胞的慢病毒,靶細胞是CD4陽性T淋巴細胞。HIV 能夠特征性地引起CD4陽性T淋巴細胞逐漸減少和免疫缺陷,最后導致獲得性免疫缺陷綜合征即艾滋病。艾滋病能夠引起機會性感染并最終導致死亡。病毒與宿主免疫細胞的相互作用是影響疾病發(fā)展

3、的關鍵因素。在HIV感染導致的AIDS疾病進展過程中,T細胞活化是一把雙刃劍。CD4陽性T淋巴細胞的活化在清除病毒的過程中是非常關鍵的,成熟的CD4陽性T淋巴細胞是宿主抗病毒免疫的關鍵因素。HIV包膜蛋白gp120能夠結(jié)合CD4陽性T淋巴細胞受體,進入細胞后進行復制,由于病毒顆粒的持續(xù)表達,CD4陽性T淋巴細胞增殖增加。CD4陽性T淋巴細胞活化后又可借助自身表達的凋亡受體,使已發(fā)生增殖的CD4陽性T淋巴細胞發(fā)生自身凋亡。因此,適度的CD

4、4陽性T淋巴細胞活化可能作為HIV治療的一種方法和策略。有文獻報道從人血液透析液中分離的小分了多肽及其衍生物能夠與HIV的融合多肽特異性結(jié)合并抑制HIV包膜蛋白介導的病毒進入過程。融合多肽作為HIV的組成多肽除了與病毒進入密切相關,還能夠直接影響免疫細胞如CD4陽性T淋巴細胞的活化。
　　 目的：比較天然活性產(chǎn)物淫羊藿素與經(jīng)典免疫抑制劑環(huán)孢素A對T細胞亞群的影響。觀察常用絲裂原ConA對CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞抑制功能的影

5、響與早期活化標志CD69之間的關系。研究HIV病毒包膜蛋白gp41的融合多肽對非抗原特異性和抗原特異性調(diào)節(jié)性T細胞的影響。
　　 方法:無菌分離出小鼠脾臟,紅細胞裂解液裂解細胞,標記好 CFSE 染料的細胞3×105 每孔種植于96孔板中,研究 OVA的T 細胞增殖以及藥物淫羊藿素 Icaritin的作用,流式細胞儀檢測。細胞采用直接免疫熒光標記法對每組細胞進行染色,分析藥物淫羊藿素 Icaritin 對 CD4 陽性T 細胞表

6、面標志 IL-2 受體CD25的表達。研究 CD4 陽性T細胞表面標志IL-2受體CD25的表達以及藥物淫羊藿素:Icaritin的作用,流式細胞儀檢測。ELISA 檢測IL-2的分泌。用免疫磁珠分離 BALB/c小鼠脾臟 CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T 細胞、CD4+CD25-效應性T細胞,加入不同濃度的ConA,12h 后收集細胞,流式細胞分析其 CD69的表達。CFSE 標記 CD4+CD25-效應性T細胞,按2:1比例與CD4+CD

7、25+調(diào)節(jié)性T細胞共同培養(yǎng),培養(yǎng)同時加 ConA,3d后流式細胞儀分析ConA對CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞抑制CD4+CD25-效應性T 細胞增殖的影響。流式細胞儀檢測HIV病毒包膜蛋白gp41的融合多肽FP對ConA及PDB刺激的非抗原特異性和OVA抗原刺激的抗原特異性調(diào)節(jié)性T細胞的早期活化表面分子標志CD69的影響。
　　 結(jié)果:通過流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn)淫羊藿素能抑制小鼠 T 細胞增殖和CD4陽性T細胞增殖。淫羊藿素能抑制

8、CD4陽性T 細胞 IL-2 受體 CD25的表達,同時也能抑制 T 細胞分泌 IL-2。通過 ConA 能劑量依賴性地升高 CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞和CD4+CD25-效應性T細胞CD69的表達,對兩群細胞CD69的升高表現(xiàn)出了相似的作用:另外,ConA在上述濃度能劑量依賴激活CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞的抑制功能。HIV 病毒包膜蛋白gp41的融合多肽FP升高OVA抗原刺激的抗原特異性調(diào)節(jié)性T細胞的早期活化表面分子標志CD6

9、9,對ConA及PDB刺激的非抗原特異性調(diào)節(jié)性T細胞的早期活化表面分子標志CD69則沒有影響。
　　 結(jié)論:天然活性產(chǎn)物淫羊藿素具有免疫抑制功能。ConA 在體外對 CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T 細胞活化和功能具有促進作用。ConA 能一定程度模擬抗原,因而可用于評價藥物對調(diào)節(jié)性T細胞的活化和功能影響。HIV 包膜蛋白gp41 融合多肽 FP不影響非抗原特異性調(diào)節(jié)性T 細胞的功能,但是能夠激活抗原特異性調(diào)節(jié)性T細胞抑制效應性T細胞