2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、家蠶核型多角體病毒(Bombyx mori nuclearpolyhedrin virus,BmNPV)是桿狀病毒中研究較為深入的一種病毒,在BmNPV的生活周期中,產(chǎn)生兩種病毒形態(tài)包涵體病毒(Occluded virus,OV)和芽生型病毒(Budded virus,BV),這兩種病毒形態(tài)在病毒致病機(jī)理上起著不同的作用。BV和OV雖然在遺傳學(xué)上相同,但組成其囊膜的脂質(zhì)和蛋白質(zhì)不同,這對各自的組織定向性具有重要性。gp41基因是目前已獲

2、得全基因組的桿狀病毒中都保守存在的基因,其蛋白產(chǎn)物GP41僅存在于ODV中,并定位于包涵體病毒囊膜和核衣殼之間。da26基因不保守,只存在于幾種桿狀病毒中,其蛋白產(chǎn)物BV/ODV-E26(E26)為囊膜蛋白,同時存在于BV和ODV中。gp41和da26是BmNPV中與病毒結(jié)構(gòu)有關(guān)的基因。為了更深入的了解gp41和da26基因在BmNPV中的結(jié)構(gòu)與功能,我們就gp41和da26基因在家蠶BmN細(xì)胞中的表達(dá)特征及相關(guān)功能開展了研究,主要研究

3、結(jié)果如下:
   為了研究BmNPV中GP41蛋白的包裝功能,從BmNPV基因組中克隆了gp41基因,并將其克隆到桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體pFastBac1-GFP中,構(gòu)建重組轉(zhuǎn)移載體pFastBac1-gp41-GFP;利用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)(Bac-to-Bac)篩選重組桿狀病毒,在家蠶細(xì)胞系BmN中進(jìn)行了融合表達(dá)和定位研究。SDS-PAGE和Western-blot檢測結(jié)果顯示,融合蛋白的大小為65kD左右,證明該融合蛋白在BmN中

4、成功表達(dá)。熒光顯微鏡的觀察表明,綠色熒光充滿在細(xì)胞質(zhì)中,不能形成聚集體;與野生型BmNPV混合感染的實驗也表明,熒光出現(xiàn)的位置與多角體無關(guān),說明GP41-GFP蛋白不能附著在多角體表面,融合表達(dá)可能影響了GP41蛋白與多角體的結(jié)合。
   啟動子polh的調(diào)控下,DA26蛋白的表達(dá)研究。我們從BmNPV基因組中克隆了da26基因,并將其克隆到桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體pFastBacl-GFP中,構(gòu)建重組轉(zhuǎn)移載體pFastBacl-da2

5、6-GFP;利用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)(Bac-to-Bac)篩選重組桿狀病毒,在家蠶細(xì)胞系BmN中進(jìn)行了融合表達(dá)。熒光顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)融合蛋白DA26-GFP在細(xì)胞中呈顆粒狀分布,單個細(xì)胞中顆粒數(shù)不等。由于DA26蛋白具有易被洗脫劑或去污劑洗脫的特點(diǎn),根據(jù)此特征,我們對DA26蛋白進(jìn)行了純化。將純化的DA26-GFP蛋白進(jìn)行SDS-PAGE,發(fā)現(xiàn)一些與DA26蛋白相關(guān)的蛋白條帶。將感興趣的條帶進(jìn)行質(zhì)譜分析得出其相應(yīng)基因為vp39和bro-li

6、ke。推測BmNPV DA26基因可能與bro-like,VP39及肌動蛋白形成復(fù)合物,參與與病毒復(fù)制或蛋白水解等有關(guān)的活動。
   近年來,對BmNPV的分子生物學(xué)研究倍受重視,并取得了迅速的發(fā)展,但BmNPV大多數(shù)基因的功能都是根據(jù)苜蓿銀紋夜蛾核型多角體病毒同源基因的功能推斷而來,到目前為止確定功能的基因只有少數(shù)。gp41和da26基因是與病毒結(jié)構(gòu)有關(guān)的基因,該種基因決定了病毒入侵宿主細(xì)胞的方式和能力,對病毒的繁殖有著重要的

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